एलिसा और एलीस्पॉट के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि एलिसा एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जो स्रावित सिग्नलिंग प्रोटीन की कुल एकाग्रता को निर्धारित करती है, जबकि एलिसपॉट एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जो व्यक्तिगत साइटोकाइन-स्रावित कोशिकाओं का पता लगाता है।
एलिसा और एलिस्पॉट दो एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट एसेज़ हैं जिनका व्यापक रूप से दवा, प्लांट पैथोलॉजी, जैव प्रौद्योगिकी और विभिन्न दवा उद्योगों में उपयोग किया जाता है। इन तकनीकों में, इसके खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी द्वारा एक प्रोटीन विश्लेषण का पता लगाया जाता है। एलिसा प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल किया जाने वाला सबसे लोकप्रिय एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख है। दूसरी ओर, एलिसपॉट एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जिसका उपयोग एलिसा के बजाय नहीं किया जाता है, बल्कि प्रयोगशालाओं में एलिसा के अलावा किया जाता है।
एलिसा परख क्या है?
एलिसा एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जो स्रावित सिग्नलिंग प्रोटीन की कुल एकाग्रता को निर्धारित करता है। यह एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला विश्लेषणात्मक जैव रसायन परख है जिसे पहली बार 1971 में एंगवॉल और पर्लमैन द्वारा वर्णित किया गया था। यह तकनीक इस विशिष्ट प्रोटीन के खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी का उपयोग करके तरल नमूने में एक विशिष्ट प्रोटीन की उपस्थिति का पता लगाने के लिए एक ठोस-चरण प्रकार के एंजाइम इम्यूनोसे का उपयोग करती है। यह परख दवा, पादप विकृति विज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी में आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला नैदानिक उपकरण है।
एलिसा टेस्ट का तंत्र
अधिकांश एलिसा परीक्षण में, एक अज्ञात मात्रा में एंटीजन को शुरुआत में एक ठोस समर्थन (माइक्रोलीटर प्लेट) पर स्थिर किया जाता है। फिर मैचिंग प्राइमरी एंटीबॉडी को सॉलिड सपोर्ट सरफेस पर लगाया जाता है। यह एंटीबॉडी एंटीजन (एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स) के साथ एक कॉम्प्लेक्स बनाती है। प्रतिजन बाध्य प्राथमिक प्रतिरक्षी का पता द्वितीयक प्रतिरक्षी द्वारा लगाया जा सकता है जो जैवसंयुग्मन के माध्यम से एक एंजाइम से जुड़ा होता है।एलिसा परीक्षण के अंतिम चरण में, एंजाइम के सब्सट्रेट वाले पदार्थ को जोड़ा जाता है। यदि एंटीजन के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी का उचित बंधन होता है, तो सब्सट्रेट द्वारा एक पता लगाने योग्य रंग परिवर्तन उत्पन्न होता है। अंततः, यह नमूने में प्रतिजन की मात्रा निर्धारित करता है।
चित्र 01: एलिसा के विभिन्न प्रकार
इसके अलावा, एलिसा के लिए अलग-अलग दृष्टिकोण हैं, जैसे प्रत्यक्ष एलिसा और अप्रत्यक्ष एलिसा। वर्तमान में, विभिन्न एलिसा परीक्षणों का उपयोग माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस, रोटावायरस, हेपेटाइटिस बी वायरस, हेपेटाइटिस सी वायरस, एंटरोटॉक्सिन उत्पादक ई.कोली, एचआईवी और SARS-CoV-2 जैसे मानव रोगजनकों का पता लगाने के लिए किया जाता है।
एलिस्पॉट परख क्या है?
एलिस्पॉट एक एंजाइम से जुड़ा इम्युनोसॉरबेंट परख है जो व्यक्तिगत साइटोकाइन-स्रावित कोशिकाओं का पता लगाता है। सेसिल ज़ेरकिंस्की ने पहली बार 1983 में एलिसपॉट का वर्णन किया था।यह एक प्रकार की परख है जो एकल कोशिका के लिए साइटोकाइन स्राव की आवृत्ति को मात्रात्मक रूप से मापने पर केंद्रित है। इसे एक ऐसी तकनीक के रूप में भी वर्गीकृत किया जाता है जो जैविक या रासायनिक प्रोटीन विश्लेषण का पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करती है। Fluorospot परख, Elispot परख का एक रूपांतर है, जो कई विश्लेषणों (अधिक गुप्त प्रोटीन) का विश्लेषण करने के लिए प्रतिदीप्ति का उपयोग करता है।
एलिस्पॉट टेस्ट का तंत्र
इस तंत्र में, साइटोकाइन विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी शुरू में माइक्रोलीटर प्लेटों के कुओं में जोड़े जाते हैं। फिर देखी जा रही वांछित कोशिकाओं को कुओं में जोड़ा जाता है। बाद में, कोशिकाओं को ऊष्मायन किया जाता है। सेल ऊष्मायन के दौरान, कोशिकाओं को किसी भी उत्तेजना पर प्रतिक्रिया करने और साइटोकिन को छिपाने की अनुमति दी जाती है। इनक्यूबेटेड कोशिकाओं द्वारा स्रावित साइटोकिन्स एंटीबॉडी से जुड़ जाएंगे क्योंकि कोशिकाएं साइटोकाइन विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी से घिरी होती हैं।
चित्रा 02: एलीस्पॉट परख
इन साइटोकिन विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, बायोटिनाइलेटेड विशिष्ट पहचान एंटीबॉडी को कुएं में जोड़ा जाता है। बायोटिनाइलेटेड विशिष्ट पहचान एंटीबॉडी कुओं में साइटोकाइन विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को पकड़ लेते हैं। इसके अलावा, स्ट्रेप्टाविडिन-एंजाइम संयुग्मों को कुओं में जोड़ा जाता है ताकि पता लगाने वाले एंटीबॉडी के साथ बाँध सकें। अंतिम चरण में, विशिष्ट सबस्ट्रेट्स को कुओं में जोड़ा जाता है। एंजाइम संयुग्म और सब्सट्रेट की प्रतिक्रियाएं कुओं में अलग-अलग धब्बे पैदा करती हैं। इन विशिष्ट स्थानों को एक स्वचालित ELISpot रीडर पर पढ़ा जाता है। अंततः, यह आगे साइटोकाइन स्राव की आवृत्ति की गणना करेगा।
एलिसा और एलीस्पॉट के बीच समानताएं क्या हैं?
- वे दोनों एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट एसेज़ हैं।
- दोनों परख विशिष्ट प्रोटीन विश्लेषण का पता लगाते हैं।
- ये परख प्रोटीन विश्लेषण की पहचान करने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं।
- दोनों परख एंजाइमों और सबस्ट्रेट्स का उपयोग करते हैं।
- इनका उपयोग चिकित्सा प्रयोगशालाओं में नैदानिक उपकरण के रूप में किया जाता है।
एलिसा और एलीस्पॉट में क्या अंतर है?
एलिसा एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जो स्रावित सिग्नलिंग प्रोटीन की कुल एकाग्रता को निर्धारित करता है। दूसरी ओर, एलिसपॉट एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख है जो व्यक्तिगत साइटोकाइन स्रावित कोशिकाओं को मापता है। तो, यह एलिसा और एलीस्पॉट के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, एलिसा परीक्षण में, एंटीजन को सबसे पहले माइक्रोलीटर कुओं पर स्थिर किया जाता है। इसके विपरीत, एलीस्पॉट परीक्षण में, एंटीबॉडी को सबसे पहले माइक्रोलीटर कुओं पर स्थिर किया जाता है। इस प्रकार, यह एलिसा और एलीस्पॉट के बीच एक और अंतर है।
नीचे दिए गए इन्फोग्राफिक में एलिसा और एलीस्पॉट के बीच अंतर का एक विस्तृत विश्लेषण सारणीबद्ध रूप में प्रस्तुत किया गया है।
सारांश – एलिसा बनाम एलिसपॉट
एलिसा और एलीस्पॉट दो एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट एसेज़ हैं जिनका व्यापक रूप से दवा, पादप विकृति विज्ञान, जैव प्रौद्योगिकी और विभिन्न दवा उद्योगों में उपयोग किया जाता है। एलिसा एक तरल नमूने में एक लिगैंड (प्रोटीन) की उपस्थिति का पता लगाता है, जिसे मापने के लिए लिगैंड के खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की निगरानी के लिए एलिस्पॉट परख एक व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली विधि है। यह एंटीबॉडी का उपयोग करके व्यक्तिगत साइटोकिन स्रावित कोशिकाओं का पता लगाता है। यह एक इम्यूनोएसे और बायोएसे तकनीक दोनों है। इस प्रकार, यह एलिसा और एलीस्पॉट के बीच अंतर का सारांश है।
