गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि गोल्डन गेट क्लोन किए जाने के लिए एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर करता है, जबकि गिब्सन असेंबली एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर नहीं करती है। क्लोन किया जाए।
पिछले दशकों में, आणविक वैज्ञानिकों ने विभिन्न मानकीकृत प्रक्रियाएं विकसित की हैं जो एक ही टुकड़े में कई डीएनए टुकड़ों के आसान संयोजन की अनुमति देती हैं। इसलिए, वैज्ञानिक प्रयोगों में शोधकर्ताओं द्वारा प्रतिबंध एंजाइम बंधन, गेटवे क्लोनिंग, गिब्सन असेंबली, गोल्डन गेट असेंबली और टीओपीओ क्लोनिंग जैसी क्लोनिंग विधियों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।इसलिए, गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली दो आणविक क्लोनिंग विधियां हैं जो एक ही टुकड़े में कई डीएनए टुकड़ों के संयोजन की अनुमति देती हैं।
गोल्डन गेट असेंबली क्या है?
गोल्डन गेट एक आणविक क्लोनिंग विधि है जो एक ही टुकड़े में कई डीएनए टुकड़ों के संयोजन की सुविधा प्रदान करती है। यह विधि क्लोन किए जाने वाले एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर करती है। इसकी उत्पत्ति 1996 में हुई थी। यह तकनीक टाइप IIS प्रतिबंध एंजाइम और T4 डीएनए लिगेज का उपयोग करती है। ये एंजाइम मान्यता स्थलों के बाहर डीएनए को काटते हैं। वे गैर-पैलिंड्रोमिक ओवरहैंग बना सकते हैं। इसलिए, डीएनए के कई टुकड़ों को ओवरहैंग अनुक्रमों के संयोजन का उपयोग करके इकट्ठा किया जा सकता है।
चित्र 01: गोल्डन गेट
गोल्डन गेट असेंबली प्रक्रिया
गोल्डन गेट तकनीक की प्रक्रिया में मुख्य तीन चरण हैं:
- क्लोनिंग वेक्टर में ओवरहैंग का निर्माण,
- ओवरहैंग्स में फ़्रैगमेंट-विशिष्ट अनुक्रमों का उपयोग करके कई डीएनए इंसर्ट का संयोजन, और
- बंधन।
गोल्डन गेट असेंबली सर्कुलर क्लोनिंग वैक्टर (गंतव्य वेक्टर) का उपयोग करती है। इसके अलावा, इस पद्धति में, पाचन और बंधाव को एक साथ पूरा करने के लिए प्रतिबंध साइट को लिगेट किए गए उत्पाद से हटा दिया जाता है। गोल्डन गेट के लिए एक विशिष्ट थर्मल चक्र प्रोटोकॉल 37 डिग्री सेल्सियस और 16 डिग्री सेल्सियस के बीच दोलन करता है क्योंकि 37 डिग्री सेल्सियस प्रतिबंध एंजाइमों के लिए इष्टतम है और 16 डिग्री सेल्सियस लिगेज के लिए इष्टतम है।
गिब्सन असेंबली क्या है?
गिब्सन असेंबली एक आणविक क्लोनिंग विधि है जो एक ही टुकड़े में कई डीएनए टुकड़ों के संयोजन की अनुमति देती है। गोल्डन गेट पद्धति के विपरीत, यह विधि क्लोन किए जाने वाले किसी विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर नहीं करती है।इसे जे क्रेग वेंटर इंस्टीट्यूट के डेनियल जी. गिब्सन ने खोजा था। यह तकनीक एक प्रकार का अनुक्रम और लिगेज स्वतंत्र क्लोनिंग (SLIC) विधि है।
चित्र 02: गिब्सन असेंबली
गिब्सन विधानसभा प्रक्रिया
गिब्सन असेंबली को डीएनए अंशों की जरूरत है जिसमें 20-40 आधार जोड़े होते हैं जो आसन्न डीएनए टुकड़ों के साथ अतिव्यापी होते हैं। पीसीआर के माध्यम से ओवरलैप जोड़े जाते हैं। फिर इन डीएनए अंशों को गिब्सन मेसर मिश्रण में जोड़ा जाता है जिसमें तीन एंजाइम होते हैं। यह प्रक्रिया तीन अलग-अलग एंजाइमों का उपयोग करके इज़ोटेर्मल स्थितियों (1 घंटे के लिए 50 डिग्री सेल्सियस) के तहत की जाती है: एक्सोन्यूक्लिज़, डीएनए पोलीमरेज़ और डीएनए लिगेज। एक्सोन्यूक्लिज डीएनए को 5' छोर से वापस चबाता है। इस प्रकार, यह पोलीमरेज़ गतिविधि को बाधित नहीं करता है और प्रतिक्रिया को एक ही प्रक्रिया में आगे बढ़ने देता है।ओवरलैप अनुक्रमों के कारण आसन्न डीएनए अंशों पर परिणामी एकल-फंसे क्षेत्रों को annealed किया जा सकता है। डीएनए पोलीमरेज़ न्यूक्लियोटाइड जोड़कर अंतराल को भरता है। अंत में, डीएनए लिगेज सहसंयोजक रूप से आसन्न खंडों के डीएनए में शामिल हो जाता है। आम तौर पर, गिब्सन असेंबली रेखीयकृत गंतव्य वैक्टर का उपयोग करती है। इसके अलावा, यह विधि अनुक्रम समानता के आधार पर एक साथ 15 डीएनए अंशों को जोड़ सकती है।
गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच समानताएं
- गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली दो आणविक क्लोनिंग विधियां हैं।
- दोनों विधियां एक ही टुकड़े में कई डीएनए अंशों को इकट्ठा कर सकती हैं।
- ये तरीके गंतव्य वैक्टर का उपयोग करते हैं।
- दोनों विधियां कई डीएनए अंशों के संयोजन के लिए थर्मल साइकिलर्स का उपयोग करती हैं।
- वे साइट निर्देशित उत्परिवर्तजन में उपयोग किए जाते हैं।
गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच अंतर
गोल्डन गेट एक आणविक क्लोनिंग विधि है जिसका उपयोग कई डीएनए अंशों के संयोजन में एक टुकड़े में किया जाता है, जो क्लोन किए जाने वाले एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर करता है, जबकि गिब्सन असेंबली एक आणविक क्लोनिंग विधि है जिसका उपयोग किया जाता है क्लोन किए जाने वाले एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर भरोसा किए बिना एक ही टुकड़े में कई डीएनए अंशों का संयोजन।गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच यह महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, गोल्डन गेट विधि एक गोलाकार गंतव्य वेक्टर का उपयोग करती है, जबकि गिब्सन असेंबली विधि एक रैखिक गंतव्य वेक्टर का उपयोग करती है।
निम्नलिखित इन्फोग्राफिक गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच अंतर को सारणीबद्ध करता है।
सारांश – गोल्डन गेट बनाम गिब्सन असेंबली
आणविक क्लोनिंग एक विधि है जिसका उपयोग पुनः संयोजक डीएनए अणुओं को इकट्ठा करने और मेजबान जीवों के भीतर उनकी प्रतिकृति को निर्देशित करने के लिए किया जाता है। गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली दो आणविक क्लोनिंग विधियाँ हैं जो एक ही टुकड़े में कई डीएनए टुकड़ों के संयोजन की अनुमति देती हैं। गोल्डन गेट विधि क्लोन किए जाने वाले एक विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर करती है, जबकि गिब्सन असेंबली क्लोन किए जाने वाले किसी विशेष अनुक्रम के भीतर प्रतिबंध साइटों की उपस्थिति पर निर्भर नहीं करती है। इस प्रकार, गोल्डन गेट और गिब्सन असेंबली के बीच यह महत्वपूर्ण अंतर है।
