क्रोमेटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि क्रोमैटोफोकसिंग एक प्रकार का कॉलम क्रोमैटोग्राफी तरीका है जो आयन एक्सचेंज रेजिन का उपयोग करता है जबकि आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग एक प्रकार की इलेक्ट्रोफोरेसिस तकनीक है जो स्थिर पीएच ग्रेडिएंट जैल का उपयोग करती है।
क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग दो तकनीकें हैं जो प्रोटीन को उनके आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट्स के अनुसार अलग करती हैं। क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग दोनों में महान संकल्प शक्ति होती है। क्रोमैटोफोकसिंग एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन कॉलम क्रोमैटोग्राफी विधि है जबकि आइसोइलेक्ट्रिक फ़ोकसिंग एक इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण विधि है।इसके अलावा, क्रोमैटोफोकसिंग एक विद्युत क्षेत्र का उपयोग नहीं करता है जबकि आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग को एक विद्युत क्षेत्र की आवश्यकता होती है।
क्रोमेटोफोकसिंग क्या है?
क्रोमैटोफोकसिंग एक प्रकार का उच्च रेफरेंस क्रोमैटोग्राफी है जो प्रोटीन को उनके आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट में अंतर के अनुसार अलग करता है। यह आयन एक्सचेंज रेजिन कॉलम और आंतरिक रूप से विकसित पीएच ग्रेडिएंट का उपयोग करता है। आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के विपरीत, क्रोमैटोफोकसिंग में विद्युत क्षेत्र शामिल नहीं होता है। क्रोमैटोफोकसिंग एक शक्तिशाली शुद्धिकरण तकनीक है जो अत्यधिक समान अणुओं को केवल 0.02 पीएच इकाइयों के अंतर से भी हल कर सकती है। इसलिए, क्रोमैटोफोकसिंग अंतिम पॉलिशिंग चरण के रूप में सबसे उपयुक्त है जब बहुत समान घटकों को अलग करने में उच्च रिज़ॉल्यूशन की आवश्यकता होती है।
क्रोमेटोफोकसिंग में सैंपल को स्टार्ट बफर के साथ मिलाकर कॉलम पर लगाया जाता है। प्रोटीन जो अपने आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु के ऊपर एक पीएच पर होते हैं, वे नकारात्मक रूप से चार्ज होते हैं और वे स्तंभ के शीर्ष के पास रहते हैं जबकि अन्य प्रोटीन जो अपने आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु के नीचे पीएच पर होते हैं, स्तंभ के नीचे चले जाते हैं।उच्चतम आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट वाले प्रोटीन को सबसे पहले एल्यूट किया जाता है जबकि सबसे कम आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट वाले प्रोटीन को कॉलम से आखिरी में निकाला जाता है। यह तकनीक कई कारकों से प्रभावित होती है जैसे प्रोटीन वर्षा और पीएच ग्रेडिएंट की रैखिकता।
आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग क्या है?
आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग एक ऐसी तकनीक है जो विभिन्न अणुओं को उनके आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट के आधार पर अलग करती है। इसे इलेक्ट्रोफोकसिंग के रूप में भी जाना जाता है। इस तकनीक का उपयोग अक्सर जेल में प्रोटीन पृथक्करण के लिए किया जाता है। आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग में, नमूना को स्थिर पीएच ग्रेडिएंट (आईपीजी) जैल में जोड़ा जाता है। आईपीजी जेल एक एक्रिलामाइड जेल मैट्रिक्स है जो पीएच ग्रेडिएंट के साथ कोपोलिमराइज़ किया जाता है। प्रोटीन कैथोड की ओर तब तक चले जाते हैं जब तक कि वे अपने आइसोइलेक्ट्रिक बिंदुओं का पीएच क्षेत्र नहीं ढूंढ लेते। जब कोई प्रोटीन उस pH पर पहुँच जाता है जिसमें कोई नेट चार्ज नहीं होता है, तो प्रवास बंद हो जाता है और एक स्थिर बैंड देता है। इसी तरह, प्रत्येक प्रोटीन अपने आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु के अनुरूप पीएच ग्रेडिएंट में एक बिंदु पर एक बैंड देता है।
चित्रा 01: आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग
आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग द्वि-आयामी जेल वैद्युतकणसंचलन का पहला चरण है। उस तकनीक में, प्रोटीन को पहले उनके आइसोइलेक्ट्रिक बिंदुओं के अनुसार आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग द्वारा अलग किया जाता है और फिर एसडीएस-पेज के माध्यम से उनके आणविक भार से अलग किया जाता है।
क्रोमेटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के बीच समानताएं क्या हैं?
- क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग दो अत्यधिक समाधान विधियां हैं।
- दोनों प्रोटीन के आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट पर आधारित हैं।
- ये तकनीक एक पीएच ग्रेडिएंट का उपयोग करती हैं।
- दोनों प्रक्रियाएं मानव हीमोग्लोबिन वेरिएंट के लक्षण वर्णन के लिए सूचनात्मक हैं।
- वे अणुओं को हल कर सकते हैं जहां पीआई मान 0.02 पीएच यूनिट जितना कम हो।
क्रोमेटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग में क्या अंतर है?
क्रोमैटोफोकसिंग एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन कॉलम क्रोमैटोग्राफी तकनीक है जो प्रोटीन को उनके आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट के अनुसार अलग करती है। इसके विपरीत, आइसोइलेक्ट्रिक फ़ोकसिंग एक इलेक्ट्रोफोरेटिक तकनीक है जो एक केशिका में बने पीएच ग्रेडिएंट के साथ एक विद्युत क्षेत्र के अनुप्रयोग द्वारा प्रोटीन को उनके आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु के अनुसार अलग करती है। तो, यह क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
क्रोमेटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के बीच एक और अंतर यह है कि क्रोमैटोफोकसिंग में एक विद्युत क्षेत्र शामिल नहीं होता है जबकि आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के लिए एक विद्युत क्षेत्र की आवश्यकता होती है।
सारांश - क्रोमैटोफोकसिंग बनाम आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग
क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग दो समान तकनीकें हैं जिनमें अणुओं की उच्च संकल्प क्षमता होती है, विशेष रूप से बहुत समान अणु। क्रोमैटोफोकसिंग एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन कॉलम क्रोमैटोग्राफी तकनीक है जबकि आइसोइलेक्ट्रिक फ़ोकसिंग एक वैद्युतकणसंचलन विधि है। क्रोमैटोफोकसिंग में आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के विपरीत एक विद्युत क्षेत्र शामिल नहीं होता है। इस प्रकार, यह क्रोमैटोफोकसिंग और आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग के बीच अंतर को सारांशित करता है।
