मुख्य अंतर – आरएपीडी बनाम आरएफएलपी
आण्विक जीवविज्ञान में आनुवंशिक मार्करों का उपयोग व्यक्तियों और प्रजातियों के बीच आनुवंशिक विविधताओं की पहचान करने के लिए किया जाता है। रैंडम एम्प्लीफाइड पॉलीमॉर्फिक डीएनए (आरएपीडी) और रेस्ट्रिक्शन फ्रैगमेंट लेंथ पॉलीमॉर्फिज्म (आरएफएलपी) दो महत्वपूर्ण आणविक मार्कर हैं जो नियमित रूप से प्रयोगशालाओं में उपयोग किए जाते हैं। आरएपीडी छोटे और मनमाने ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों के साथ किया जाता है, और यह जीव के टेम्पलेट डीएनए में कई स्थानों के यादृच्छिक प्रवर्धन पर आधारित है। RFLP एक विशिष्ट प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइज के साथ किया जाता है, और यह परिणामी प्रतिबंध टुकड़ों और संकरण के बहुरूपता पर आधारित है।आरएपीएल और आरएफएलपी के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि आरएपीडी एक प्रकार की पीसीआर तकनीक है जिसे पूर्व अनुक्रम ज्ञान के बिना किया जाता है जबकि आरएफएलपी पीसीआर में शामिल नहीं है और तकनीक को अंजाम देने के लिए पूर्व अनुक्रम ज्ञान की आवश्यकता होती है।
आरएपीडी क्या है?
RAPD आणविक जीव विज्ञान में एक उपयोगी आणविक मार्कर है। यह एक त्वरित और आसान तकनीक है। आरएपीडी को एक विधि के रूप में परिभाषित किया जा सकता है जिसके परिणामस्वरूप लक्ष्य डीएनए टेम्पलेट के कई स्थानों के यादृच्छिक प्रवर्धन के परिणामस्वरूप बहुरूपी डीएनए अनुक्रम होते हैं। आरएपीडी पीसीआर प्रवर्धन के लिए मनमाने अनुक्रमों के साथ लघु ओलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों का उपयोग करता है। पूर्व अनुक्रम ज्ञान के बिना प्राइमरों को कृत्रिम रूप से संश्लेषित किया जाता है। इसलिए, इसे एक आसान और उपयोगी तकनीक माना जाता है।
आरएपीडी में निम्नलिखित प्रमुख कदम शामिल हैं।
- लक्ष्य डीएनए का निष्कर्षण
- यादृच्छिक रूप से चुने गए प्राइमरों का उपयोग करके लक्ष्य डीएनए के कई स्थानों का प्रवर्धन
- प्रवर्धित पीसीआर उत्पादों का जेल वैद्युतकणसंचलन
- एथिडियम ब्रोमाइड से धुंधला हो जाना और बहुरूपता की पहचान
प्राइमर एनीलिंग में भिन्नता के परिणामस्वरूप, प्रवर्धन के दौरान अलग-अलग लंबाई के अलग-अलग टुकड़े उत्पन्न होते हैं। इसलिए, जैल पर बैंडिंग पैटर्न व्यक्तियों और प्रजातियों के बीच भिन्न होते हैं। इस प्रकार, आरएपीडी पहचान और भेदभाव में जीवों के बीच आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाने में सक्षम बनाता है।
RAPD को आणविक जीव विज्ञान के विभिन्न अध्ययनों में लागू किया जाता है जैसे कि निकट से संबंधित प्रजातियों के बीच आनुवंशिक अंतर की पहचान, जीन मैपिंग, डीएनए फिंगरप्रिंटिंग, विरासत में मिली बीमारियों की पहचान, आदि।
चित्र 01: आरएपीडी
आरएफएलपी क्या है?
प्रतिबंध खंड लंबाई बहुरूपता (RFLPs) एक आणविक मार्कर है जिसका उपयोग आणविक जीव विज्ञान में समजातीय डीएनए अनुक्रमों में आनुवंशिक भिन्नता की पहचान के लिए किया जाता है। यह डीएनए फिंगरप्रिंटिंग के लिए विकसित पहला आनुवंशिक मार्कर है। विशिष्ट प्रतिबंध एंजाइमों के साथ प्रतिबंधित होने पर सभी जीव अद्वितीय डीएनए प्रोफाइल का उत्पादन करते हैं। आरएफएलपी व्यक्तियों के अद्वितीय डीएनए प्रोफाइल बनाने और उनमें आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाने में एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है। जब डीएनए नमूनों को विशिष्ट प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस के साथ पचाया जाता है, तो यह अलग-अलग डीएनए प्रोफाइल उत्पन्न करता है जो प्रत्येक व्यक्ति के लिए अद्वितीय होते हैं। इसलिए, इस पद्धति का प्रमुख विशिष्ट प्रतिबंध एंजाइमों के साथ सजातीय डीएनए को प्रतिबंधित करके जीवों के बीच आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाना और जेल वैद्युतकणसंचलन और सोख्ता के माध्यम से खंड लंबाई बहुरूपता का विश्लेषण है। ब्लॉटिंग पैटर्न प्रत्येक जीव के लिए अद्वितीय होते हैं और विशिष्ट जीनोटाइप की विशेषता रखते हैं।
आरएफएलपी के साथ निम्नलिखित कदम शामिल हैं।
- नमूनों से डीएनए की पर्याप्त मात्रा को अलग करना
- विशिष्ट प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइज के साथ डीएनए नमूनों का लघु क्रम में विखंडन
- अगारोज जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग-अलग लंबाई के परिणामी टुकड़ों को अलग करना।
- दक्षिणी सोख्ता द्वारा जेल प्रोफाइल का झिल्ली में स्थानांतरण
- लेबल जांच के साथ झिल्ली का संकरण और प्रत्येक प्रोफ़ाइल में खंड लंबाई बहुरूपता का विश्लेषण
RFLP में विभिन्न अनुप्रयोग हैं जैसे वंशानुक्रम रोगों का निदान, जीनोम मैपिंग, फोरेंसिक अध्ययन में आपराधिक पहचान, पितृत्व परीक्षण, आदि।
चित्र 02: RFLP जीनोटाइपिंग
आरएपीडी और आरएफएलपी में क्या अंतर है?
आरएपीडी बनाम आरएफएलपी |
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| आरएपीडी यादृच्छिक प्राइमरों और पीसीआर पर आधारित एक आणविक मार्कर है। | RFLP एक आणविक मार्कर है जो विभिन्न लंबाई प्रतिबंध टुकड़ों के उत्पादन पर आधारित है। |
| आवश्यक नमूना | |
| आरएपीडी विश्लेषण के लिए डीएनए के छोटे नमूने पर्याप्त हैं। | आरएफएलपी विश्लेषण के लिए बड़ी मात्रा में निकाले गए डीएनए नमूने की आवश्यकता है। |
| समय | |
| आरएपीडी एक त्वरित प्रक्रिया है। | RFLP एक समय लेने वाली प्रक्रिया है। |
| प्राइमर उपयोग | |
| रैंडम प्राइमर का उपयोग किया जाता है और विभिन्न प्रजातियों के लिए एक ही प्राइमर का उपयोग किया जा सकता है। | संकरण के लिए RFLP में प्रजाति-विशिष्ट जांच का उपयोग किया जाता है। |
| विश्वसनीयता | |
| आरएफएलपी की तुलना में तकनीक की विश्वसनीयता कम है। | RFLP एक विश्वसनीय तकनीक है। |
| ब्लोटिंग | |
| RAPD में दक्षिणी सोख्ता शामिल है। | दक्षिणी सोख्ता RFLP का एक चरण है। |
| एलेलिक वेरिएशन का पता लगाना | |
| आरएपीडी द्वारा एलीलिक विविधताओं का पता नहीं लगाया जा सकता है। | आरएफएलपी द्वारा एलीलिक विविधताओं का पता लगाया जा सकता है। |
| अनुक्रम ज्ञान की आवश्यकता | |
| RAPD को पूर्व अनुक्रम ज्ञान की आवश्यकता नहीं है। | जांच डिजाइनिंग के लिए पूर्व अनुक्रम ज्ञान आवश्यक है। |
| पीसीआर | |
| पीसीआर आरएपीडी से जुड़ा है | पीसीआर आरएफएलपी के साथ शामिल नहीं है। |
| पुनरुत्पादकता | |
| आरएपीडी की प्रजनन क्षमता कम है | RAPD की तुलना में RFLP में उच्च प्रजनन क्षमता है। |
सारांश – आरएपीडी बनाम आरएफएलपी
RAPD और RFLP आणविक जीव विज्ञान में उपयोग किए जाने वाले महत्वपूर्ण मार्कर हैं। दोनों विधियां जीवों के बीच आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाने में सक्षम हैं। आरएपीडी यादृच्छिक प्राइमरों का उपयोग करके किया जाता है। RFLP विशिष्ट प्रतिबंध एंजाइमों का उपयोग करके किया जाता है। दोनों विधियां अलग-अलग जीवों के लिए अद्वितीय डीएनए प्रोफाइल तैयार करती हैं। आरएपीडी आरएफएलपी की तुलना में तुलनात्मक रूप से कुछ कदम शामिल है। लेकिन यह RFLP की तुलना में कम विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम देता है। यह आरएपीडी और आरएफएलपी के बीच मुख्य अंतर है।
