मुख्य अंतर – AFLP बनाम RFLP
डीएनए अध्ययनों का फ़ाइलोजेनेटिक संबंधों को समझने और निर्धारित करने, आनुवंशिक रोगों के निदान और जीवों के जीनोम के मानचित्रण में अत्यधिक महत्व है। डीएनए विश्लेषण से जुड़ी कई तकनीकों का उपयोग अज्ञात डीएनए के पूल में किसी विशेष जीन या डीएनए अनुक्रम की पहचान के लिए भी किया जाता है। उन्हें आणविक मार्कर के रूप में जाना जाता है। एम्प्लीफाइड फ्रैगमेंट लेंथ पॉलीमॉर्फिज्म (एएफएलपी) और रेस्ट्रिक्शन फ्रैगमेंट लेंथ पॉलीमॉर्फिज्म (आरएफएलपी) दो ऐसे आणविक मार्कर (तरीके) हैं जिन्हें आणविक जीव विज्ञान में जीवों के बीच आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाने के लिए विकसित किया गया है। दोनों विधियां समान रूप से महत्वपूर्ण हैं और उनके फायदे और नुकसान हैं।AFLP और RFLP के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि AFLP में पचे हुए डीएनए का चयनात्मक PCR प्रवर्धन शामिल होता है जबकि RFLP में डीएनए अंशों का चयनात्मक PCR प्रवर्धन शामिल नहीं होता है।
एएफएलपी क्या है?
AFLP (एम्पलीफाइड फ्रैगमेंट लेंथ पॉलीमॉर्फिज्म) आणविक जीव विज्ञान में एक महत्वपूर्ण उपकरण है और इसका व्यापक रूप से आनुवंशिक भिन्नता विश्लेषण में उपयोग किया जाता है। एएफएलपी खंडित जीनोमिक डीएनए के विशिष्ट पीसीआर प्रवर्धन और जेल वैद्युतकणसंचलन के माध्यम से ऑटोरैडियोग्राफ़ द्वारा बहुरूपता का पता लगाने पर आधारित है। AFLP व्यापक रूप से पौधों, जानवरों, बैक्टीरिया और कवक सहित विभिन्न राज्यों के उपभेदों या निकट से संबंधित प्रजातियों में आनुवंशिक अंतर की पहचान करने में योगदान देता है। AFLP को अज्ञात डीएनए नमूनों की थोड़ी मात्रा के साथ किया जा सकता है। इसे पूर्व अनुक्रम ज्ञान और जांच की डिजाइनिंग की आवश्यकता नहीं है।
AFLP के चरण
- डीएनए का अलगाव
- प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस के साथ डीएनए का पाचन
- एडेप्टर के साथ प्रतिबंधित डीएनए अंशों का बंधन
- विशिष्ट प्रतिबंध साइटों के साथ अंशों का चयनात्मक प्रवर्धन
- जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा पीसीआर उत्पादों का पृथक्करण
- ऑटोरेडियोग्राफ़ द्वारा जेल मैट्रिक्स का विज़ुअलाइज़ेशन
AFLP एक अधिक संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि है जिसका उपयोग डीएनए अनुक्रमों के पूर्व ज्ञान के बिना कवक, बैक्टीरिया, पौधों और जानवरों सहित कई टैक्सों के डीएनए प्रोफाइलिंग में किया जा सकता है। यह अत्यधिक संवेदनशील प्रकृति के कारण आबादी में व्यक्तियों के बीच मामूली अंतर की पहचान करने में मदद करता है। AFLP जीनोम मैपिंग, फोरेंसिक अध्ययन, माता-पिता के परीक्षण, जीनोटाइपिंग आदि में भी महत्वपूर्ण है।
चित्र 01: AFLP
आरएफएलपी क्या है?
रेस्ट्रिक्शन फ्रैगमेंट लेंथ पॉलीमॉर्फिज्म (RFLPs) एक ऐसी तकनीक है, जिसका इस्तेमाल डीएनए अनुक्रमों में आनुवंशिक विविधताओं का पता लगाने के लिए किया जाता है।यह डीएनए प्रोफाइलिंग के लिए विकसित की गई पहली विधि है। जीवों में अद्वितीय डीएनए फिंगरप्रिंट या डीएनए प्रोफाइल होते हैं। RFLP एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है, जो अंतर-विशिष्ट या निकट से संबंधित जीवों के डीएनए प्रोफाइल के बीच भिन्नता का विश्लेषण करता है क्योंकि सजातीय अनुक्रमों में अलग-अलग प्रतिबंध स्थल (स्थान) होते हैं जो किसी विशेष जीव के लिए अद्वितीय होते हैं। जब समजातीय डीएनए को विशिष्ट प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस के साथ पचाया जाता है, तो इसके परिणामस्वरूप अलग-अलग डीएनए प्रोफाइल होंगे जो प्रत्येक व्यक्ति के लिए अद्वितीय होते हैं। इसलिए, इस पद्धति का प्रमुख विशिष्ट प्रतिबंध एंजाइमों के साथ सजातीय डीएनए को प्रतिबंधित करके जीवों के बीच आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाना और जेल वैद्युतकणसंचलन और सोख्ता के माध्यम से खंड लंबाई बहुरूपता का विश्लेषण है। ब्लॉटिंग पैटर्न प्रत्येक जीव के लिए अद्वितीय होते हैं और विशिष्ट जीनोटाइप की विशेषता रखते हैं।
आरएफएलपी के चरण
- नमूनों से डीएनए की पर्याप्त मात्रा को अलग करना
- विशिष्ट प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइज के साथ डीएनए नमूनों का लघु क्रम में विखंडन
- अगारोज जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग-अलग लंबाई के परिणामी टुकड़ों को अलग करना।
- दक्षिणी सोख्ता द्वारा जेल प्रोफाइल का झिल्ली में स्थानांतरण
- लेबल जांच के साथ झिल्ली का संकरण और प्रत्येक प्रोफ़ाइल में खंड लंबाई बहुरूपता का विश्लेषण
RFLP रोग वंशानुक्रम का पता लगाने और परिवार के सदस्यों के बीच रोग होने के जोखिम का पता लगाने के लिए एक बहुत ही महत्वपूर्ण तकनीक है। RFLP का उपयोग अक्सर जीनोम मैपिंग, फोरेंसिक में अपराधियों की पहचान, पितृत्व परीक्षण आदि में भी किया जाता है। RFLP की कई सीमाएँ भी हैं। RFLP को संकरण के लिए जांच डिजाइन करने के लिए अनुक्रम डेटा के पूर्व ज्ञान की आवश्यकता होती है। इसके विश्लेषण के लिए नमूने से पर्याप्त मात्रा में डीएनए को अलग करने की भी आवश्यकता होती है, जो कि फोरेंसिक अध्ययन में मुश्किल है।
चित्र 01: आरआरएफएलपी मैपिंग
AFLP और RFLP में क्या अंतर है?
एएलएफपी बनाम आरएफएलपी |
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| AFLP में पचे हुए डीएनए का चयनात्मक पीसीआर प्रवर्धन शामिल है। | RFLP में PCR शामिल नहीं है जब तक कि यह PCR-RFLP न हो। |
| अनुक्रम ज्ञान | |
| पूर्व क्रम ज्ञान की आवश्यकता नहीं है। | डिज़ाइन किए गए RFLP जांच के लिए पूर्व अनुक्रम ज्ञान आवश्यक है। |
| विश्वसनीयता | |
| यह अधिक विश्वसनीय है। | यह AFLP की तुलना में कम विश्वसनीय है। |
| बहुरूपता का पता लगाने में दक्षता | |
| RFLP की तुलना में बहुरूपता का पता लगाने में इसकी अधिक दक्षता है। | यह AFLP की तुलना में कम कुशल है। |
| लागत | |
| आरएफएलपी की तुलना में यह थोड़ा महंगा है। | यह AFLP की तुलना में कम खर्चीला है। |
| आवेदन | |
| AFLPs को जीनोम मैपिंग, डीएनए फिंगरप्रिंटिंग, आनुवंशिक विविधता अध्ययन, पितृत्व परीक्षण और फोरेंसिक पर लागू किया गया है | RFLP विश्लेषण जीनोम मैपिंग, आनुवंशिक विकारों के लिए जीन के स्थानीयकरण, रोग के जोखिम के निर्धारण और पितृत्व परीक्षण में एक महत्वपूर्ण उपकरण है। |
सारांश – AFLP बनाम RFLP
AFLP और RFLP आणविक जीव विज्ञान में आनुवंशिक संबंधों के मूल्यांकन और आनुवंशिक संबंधों के मूल्यांकन के लिए आनुवंशिक मार्कर के रूप में उपयोग की जाने वाली दो तकनीकें हैं।AFLP RFLP की तुलना में जीवों के बीच आनुवंशिक बहुरूपता का पता लगाने के लिए एक कुशल और संवेदनशील विधि के रूप में कार्य करता है। हालाँकि, हालांकि इन दोनों विधियों में आनुवंशिक विविधताओं का पता लगाने में अलग-अलग क्षमताएँ हैं, फिर भी इनका उपयोग डीएनए फ़िंगरप्रिंटिंग और रोग निदान के लिए किया जाता है।
