बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख के बीच मुख्य अंतर यह है कि बीसीए परख समय लेने वाली और कम सटीक है, जबकि ब्रैडफोर्ड परख त्वरित और सटीक है।
बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख प्रोटीन एकाग्रता निर्धारण के दो परख तरीके हैं। इन दो परखों में परख के अलग-अलग सिद्धांत हैं और उनकी सटीकता में अंतर है।
बीसीए परख क्या है?
बीसीए परख या बाइसीनोनिक एसिड परख एक जैव रासायनिक परख है जो एक घोल में प्रोटीन की कुल सांद्रता को निर्धारित करने में उपयोगी है। इस विधि को इसके आविष्कारक पॉल के स्मिथ के नाम पर स्मिथ परख भी कहा जाता है। यह विश्लेषणात्मक विधि लोरी प्रोटीन परख, ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख या बायोरेट अभिकर्मक के समानता दिखाती है।हम दिए गए नमूने में कुल प्रोटीन सांद्रता का निरीक्षण नमूना समाधान के रंग परिवर्तन के माध्यम से कर सकते हैं, जो हरे से बैंगनी रंग में जाता है। यह रंग परिवर्तन प्रोटीन सामग्री के अनुपात में होता है। इसके बाद हम नमूने में रंग की तीव्रता और प्रोटीन सामग्री का विश्लेषण करने के लिए एक वर्णमिति तकनीक का उपयोग कर सकते हैं।
प्रोटीन आकलन की बीसीए विधि
बीसीए परख के तंत्र पर विचार करते समय, विशिष्ट बीसीए समाधान में लगभग 11.25 के पीएच के साथ एक अत्यधिक क्षारीय समाधान होता है, और इस समाधान में सामग्री में बाइसीनोनिक एसिड, सोडियम कार्बोनेट, सोडियम बाइकार्बोनेट, सोडियम टार्ट्रेट और शामिल हैं। कॉपर (II) सल्फेट पेंटाहाइड्रेट। यह परख मुख्य रूप से दो रासायनिक प्रतिक्रियाओं पर निर्भर करती है: प्रोटीन में पेप्टाइड बॉन्ड द्वारा कॉपर (II) से कॉपर (I) में कमी और कॉपर (I) आयन के साथ बाइसीनोनिक एसिड के दो अणुओं का केलेशन, जिसके परिणामस्वरूप एक बैंगनी रंग का कॉम्प्लेक्स हो सकता है 562 एनएम तरंग दैर्ध्य पर प्रकाश को अवशोषित करें। पहली प्रतिक्रिया में, पेप्टाइड बॉन्ड द्वारा कम किए गए कॉपर (II) की मात्रा नमूने में प्रोटीन की मात्रा के समानुपाती होती है।
ब्रैडफोर्ड परख क्या है?
ब्रैडफोर्ड परख एक स्पेक्ट्रोस्कोपिक विश्लेषणात्मक विधि है जो किसी घोल में प्रोटीन की सांद्रता को मापने में उपयोगी है। यह विधि मैरियन एम. ब्रैडफोर्ड द्वारा 1976 में विकसित की गई थी, और यह तुलनात्मक रूप से त्वरित और सटीक विधि है।
प्रोटीन और ब्रैडफोर्ड अभिकर्मक की रंग प्रतिक्रिया
हम नमूने में प्रोटीन की मात्रा का पता लगाने के लिए इस विधि का उपयोग कर सकते हैं। इस परख के दौरान नमूने में होने वाली रासायनिक प्रतिक्रिया पूरी तरह से नमूने में प्रोटीन की अमीनो एसिड संरचना पर निर्भर करती है।
प्रोटीन आकलन की ब्रैडफोर्ड विधि
इस परख की विधि पर विचार करते समय, यह एक वर्णमिति प्रोटीन परख है जो Coomassie Brilliant Blue G-250 नामक डाई के अवशोषण बदलाव पर आधारित है। आम तौर पर, यह डाई तीन रूपों में आयनिक (नीला) रूप, तटस्थ (हरा) रूप और धनायन (लाल) रूप में मौजूद होती है। इसलिए, अम्लीय परिस्थितियों में, डाई अपना रंग लाल से नीले रंग में बदल लेती है। यह डाई के साथ प्रोटीन के बंधन के कारण है। इसके विपरीत, यदि डाई के साथ बांधने के लिए कोई प्रोटीन नहीं है, तो रंग परिवर्तन नहीं दिखाई देता है, घोल को लाल-भूरा रंग मिलता है। यह डाई वैन डेर वाल बलों और इलेक्ट्रोस्टैटिक आकर्षण के माध्यम से प्रोटीन के कार्बोक्सिल समूह के साथ एक मजबूत, गैर-सहसंयोजक परिसर बनाने में सक्षम है।
बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख में क्या अंतर है?
बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख प्रोटीन एकाग्रता निर्धारण के दो परख तरीके हैं। इन दो परखों में परख के अलग-अलग सिद्धांत हैं और उनकी सटीकता में अंतर है। बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि बीसीए परख समय लेने वाली और कम सटीक है, जबकि ब्रैडफोर्ड परख त्वरित और सटीक है।
निम्नलिखित इन्फोग्राफिक बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख के बीच अंतर को सारणीबद्ध रूप में सारांशित करता है।
सारांश – बीसीए बनाम ब्रैडफोर्ड परख
बीसीए परख या बाइसीनोनिक एसिड परख एक जैव रासायनिक परख है जो एक घोल में प्रोटीन की कुल सांद्रता को निर्धारित करने में उपयोगी है। ब्रैडफोर्ड परख एक स्पेक्ट्रोस्कोपिक विश्लेषणात्मक विधि है जो एक समाधान में प्रोटीन की एकाग्रता को मापने में उपयोगी है। बीसीए और ब्रैडफोर्ड परख के बीच मुख्य अंतर यह है कि बीसीए समय लेने वाली और कम सटीक है, जबकि ब्रैडफोर्ड परख त्वरित और सटीक है।
