मुख्य अंतर - T4 बनाम T7 डीएनए लिगेज
डीएनए लिगेज आणविक जीव विज्ञान तकनीकों में उपयोग किया जाने वाला एक महत्वपूर्ण एंजाइम है। यह न्यूक्लियोटाइड्स के बीच फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड बनाकर न्यूक्लियोटाइड्स में शामिल होने के लिए आणविक गोंद के रूप में कार्य करता है। फॉस्फोडाइस्टर बांड चीनी की मात्रा के 3 'हाइड्रॉक्सिल छोर और 5' अंत फॉस्फेट समूह के बीच बनते हैं। डीएनए लिगेज लैगिंग स्ट्रैंड के ओकाजाकी टुकड़ों में शामिल होने और डीएनए मरम्मत तंत्र के दौरान और वेक्टर जीनोम में रुचि के वांछित जीन में शामिल होने के लिए इन विट्रो क्लोनिंग प्रयोगों में प्रतिकृति प्रक्रिया में महत्वपूर्ण है। वर्तमान में आणविक जीवविज्ञानी द्वारा उपयोग किए जाने वाले दो मुख्य डीएनए लिगेज हैं: टी 4 और टी 7 डीएनए लिगेज।T4 डीएनए लिगेज T4 बैक्टीरियोफेज से पृथक होने वाले पहले एंजाइमों में से एक है। T7 डीएनए लिगेज, जो एक छोटा प्रोटीन है, एक एंजाइम है जिसे T7 बैक्टीरियोफेज से अलग किया जाता है। यह T4 और T7 डीएनए लिगेज के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
डीएनए लिगेज की क्रिया क्या है?
डीएनए बंधन तीन चरणों वाली प्रतिक्रिया में होता है। पहला कदम एटीपी के अल्फा-फॉस्फोरस पर एक न्यूक्लियोफिलिक हमला है जो एक सहसंयोजक एंजाइम-एडेनाइलेट मध्यवर्ती उत्पन्न करता है जिसमें एएमपी लाइसिन के टर्मिनल साइड-चेन नाइट्रोजन से जुड़ा होता है। दूसरे चरण में, 5'-फॉस्फेट-टर्मिनेटेड डीएनए सब्सट्रेट द्वारा एंजाइम-एडेनाइलेट के फास्फोरस पर एक न्यूक्लियोफिलिक हमला होता है, लाइसिन को मुक्त करता है और डीएनए-एडेनाइलेट बनाता है। अंतिम चरण में, डीएनए-एडेनाइलेट पर एक अन्य डीएनए स्ट्रैंड के 3'- OH द्वारा हमला किया जाता है, AMP को मुक्त करता है और पोलीन्यूक्लियोटाइड्स में शामिल होता है।
T4 डीएनए लिगेज क्या है?
T4 लिगेज पहला लिगेज था जिसे मेसेलसन, वीगल और केलेनबर्गर द्वारा पृथक और पहचाना गया था और यह अब तक का पहला व्यावसायिक लिगेज था।T4 डीएनए लिगेज एक एटीपी आश्रित एंजाइम है जो फॉस्फोडाइस्टर बांड गठन को उत्प्रेरित करता है। यह 487 अमीनो एसिड अवशेषों के साथ एक एकल पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला है और इसका आणविक भार लगभग 77 kDa है। इसकी गतिविधि के लिए इष्टतम पीएच 7.5 - 8 की सीमा में है।
चित्र 01: T4 डीएनए लिगेज
T4 DNA Ligase, जैसा कि इसके नाम से पता चलता है, बैक्टीरियोफेज T4 में मौजूद है और ई. कोलाई के संक्रमण पर फेज द्वारा एंजाइम का उत्पादन करने पर इसे अलग कर दिया गया था। एंजाइम डबल स्ट्रैंडेड डीएनए डुप्लेक्स को कुंद सिरों के साथ जोड़ता है और बंधे होने वाले टुकड़े एक दूसरे के करीब होने चाहिए।
T7 डीएनए लिगेज क्या है?
T7 लिगेज 41 kDa प्रोटीन है जो T7 बैक्टीरियोफेज द्वारा निर्मित होता है और ई. कोलाई कोशिकाओं को संक्रमित करके अलग किया जाता है। T7 लिगेज का मुख्य कार्य फॉस्फोडाइस्टर लिंकेज के माध्यम से डीएनए डुप्लेक्स को लिगेट करना और क्लोनिंग प्रयोगों के दौरान डीएनए के आस-पास के टुकड़ों को जोड़ना है।T7 डीएनए लिगेज के लिए इष्टतम पीएच 7.0 - 7.2 की सीमा में है। T7 लिगेज एटीपी पर निर्भर है। T7 डीएनए लिगेज भी डीएनए और आरएनए संकरों को नष्ट करने में सक्षम हैं, जिससे प्रतिलेखन के दौरान असामान्य अनुरूपता पैदा होती है; हालांकि, इस घटना पर अभी भी इन विट्रो अध्ययन द्वारा शोध किया जा रहा है।
T4 और T7 डीएनए लिगेज के बीच समानताएं क्या हैं?
- T4 और T7 डीएनए लिगेज डीएनए फ्रैगमेंट के 3' OH सिरे और 5' फॉस्फेट सिरे के बीच फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड फॉर्मेशन के माध्यम से डीएनए डुप्लेक्स को एनीलिंग करके एक लिगेशन रिएक्शन में भाग लेते हैं।
- दोनों एंजाइम ब्लंट एंडेड डीएनए डुप्लेक्स को लिगेट करते हैं जो एक दूसरे के करीब होते हैं।
- दोनों एंजाइम एटीपी पर निर्भर हैं।
- इन एंजाइमों को विशेष बैक्टीरियोफेज के साथ ई. कोलाई कोशिकाओं को संक्रमित करके पृथक किया जाता है।
- दोनों एंजाइमों के अनुप्रयोगों में शामिल हैं:
- आणविक क्लोनिंग - वेक्टर में रुचि के जीन को जोड़ने के लिए
- डीएनए की मरम्मत - डबल फंसे हुए निशानों की मरम्मत के लिए
- इन विट्रो डीएनए प्रतिकृति
- लिगेज चेन रिएक्शन
T4 और T7 डीएनए लिगेज में क्या अंतर है?
T4 बनाम T7 डीएनए लिगेज |
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| T4 डीएनए लिगेज प्रकार का डीएनए लिगेज बैक्टीरियोफेज टी4 से अलग किया गया है और फॉस्फोडाइस्टर बांड गठन के माध्यम से आसन्न डीएनए टुकड़ों को जोड़ने में शामिल है। | T7 डीएनए लिगेज प्रकार का डीएनए लिगेज बैक्टीरियोफेज टी7 से अलग किया गया है और फॉस्फोडाइस्टर बांड गठन के माध्यम से आसन्न डीएनए टुकड़ों को जोड़ने में शामिल है। |
| प्रोटीन का आकार | |
| T4 डीएनए लिगेज का आकार 77 kDa है - T7 डीएनए लिगेज की तुलना में बड़ा। | T7 डीएनए लिगेज का आकार 41 kDa है। |
| इष्टतम पीएच | |
| पीएच रेंज जो टी4 डीएनए लिगेज काम करती है वह 7.5 - 8.0 है। | पीएच रेंज जो टी7 डीएनए लिगेज काम करती है वह 7.0 - 7.2 है। |
सारांश - T4 बनाम T7 डीएनए लिगेज
डीएनए लिगेज आणविक क्लोनिंग में शामिल एंजाइमों का एक महत्वपूर्ण वर्ग है जो ब्याज के जीन वाले पुनः संयोजक डीएनए अणुओं का उत्पादन करता है। बंधाव प्रतिक्रिया एक ऊर्जा का उपयोग करने वाली प्रतिक्रिया है और उपलब्ध लिगेज को संशोधित करके सटीकता में सुधार के लिए उपन्यास अनुसंधान अध्ययन चल रहे हैं। T4 और T7 डीएनए लिगेज दो प्रकार के महत्वपूर्ण डीएनए लिगेज एंजाइम हैं जिनका उपयोग आणविक जैविक तकनीकों में किया जाता है। T7 डीएनए लिगेज भी अनुसंधान का एक परिणाम है जो T4 संक्रमित ई. कोलाई से पृथक प्राथमिक लिगेज पर आधारित था। T7 अपने छोटे आकार के कारण अपने कार्य को करने में अधिक दक्षता और सटीकता को चित्रित करता है। यह T4 और T7 लिगेज के बीच का अंतर है।
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