मुख्य अंतर – YAC बनाम M13 फेज वेक्टर
डीएनए क्लोनिंग एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया है जो जीवों के महत्वपूर्ण डीएनए अंशों के प्रसार को सक्षम बनाती है। इसे पुनः संयोजक डीएनए बनाने के लिए वेक्टर डीएनए के साथ विशिष्ट डीएनए के जुड़ने की आवश्यकता होती है जो मेजबान जीव में बदल जाता है। एक वेक्टर एक डीएनए अणु है जो विदेशी आनुवंशिक सामग्री को किसी अन्य कोशिका या जीव में ले जाने के लिए एक वाहन के रूप में व्यवहार करता है। यह मेजबान जीव के अंदर प्रतिकृति बनाने और पुनः संयोजक डीएनए की कई प्रतियों का उत्पादन करने में सक्षम होना चाहिए। डीएनए क्लोनिंग में विभिन्न प्रकार के वैक्टर का उपयोग किया जाता है। खमीर कृत्रिम गुणसूत्र (YAC) और M13 फेज वेक्टर उनमें से दो प्रकार हैं।YAC और M13 फेज वेक्टर के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि YAC एक कृत्रिम गुणसूत्र है जो खमीर कोशिकाओं में प्रतिकृति करता है जबकि M13 फेज वेक्टर बैक्टीरियोफेज M13 का एकल फंसे हुए गोलाकार डीएनए है जो ई कोलाई कोशिकाओं में प्रतिकृति करता है।
YAC वेक्टर क्या है?
YAC एक कृत्रिम रूप से निर्मित गुणसूत्र है जो विदेशी डीएनए के एक बड़े खंड को ले जाने और खमीर कोशिकाओं के भीतर दोहराने की क्षमता रखता है। इसमें सेंट्रोमियर, टेलोमेयर और स्वायत्त रूप से प्रतिकृति अनुक्रम हैं जो प्रतिकृति और स्थिरता के लिए आवश्यक हैं। YAC को एक प्रभावी क्लोनिंग वेक्टर बनाने के लिए एक चयनात्मक मार्कर या मार्कर और प्रतिबंध साइटों को भी धारण करना चाहिए। 1000 kb से 2000 kb तक के बड़े क्रमों को YAC में डाला जा सकता है और यीस्ट में स्थानांतरित किया जा सकता है।
चित्र 01: वाईएसी वेक्टर
M13 फेज वेक्टर क्या है?
बैक्टीरियोफेज एम13 एक वायरस है जो ई कोलाई को संक्रमित और दोहराता है। M13 बैक्टीरियोफेज का जीनोम आकार में छोटा है, लगभग 6.7 kb। यह एक सिंगल स्ट्रैंडेड, सर्कुलर और पॉजिटिव सेंस डीएनए है। यह वायरस विशेष रूप से एफ पाइलस के माध्यम से ई कोलाई बैक्टीरिया को संक्रमित करता है। एक बार जब यह जीवाणु में ssDNA में प्रवेश करता है, तो यह अपने पूरक स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है और dsDNA या M13 का प्रतिकृति रूप (RF) बन जाता है। आरएफ मेजबान जीव के भीतर एक प्लाज्मिड की तरह व्यवहार कर सकता है। डीएसडीएनए ई कोलाई के भीतर प्रतिकृति बनाता है और नए फेज वाले एसएसडीएनए का उत्पादन करता है। ये नए फेज मेजबान सेल को मारे बिना ई कोलाई से लगातार जारी होते हैं। हालांकि, संक्रमण ई कोलाई के विकास को धीमा कर देता है। dsDNA को जीवाणु कोशिकाओं से निकाला जा सकता है और डीएनए क्लोनिंग में वैक्टर के रूप में उपयोग किया जा सकता है। उन्हें M13 फेज वैक्टर के रूप में जाना जाता है। उन्हें आसानी से हेरफेर किया जा सकता है और प्लास्मिड वैक्टर के समान उपयोग किया जा सकता है।
इन M13 चरणों के संक्रमण की अंतर्निहित क्षमता जीन क्लोनिंग में एक वेक्टर के रूप में उपयोग किए जाने के लिए एक अच्छी योग्यता के रूप में कार्य करती है।M13 को एक वेक्टर में विकसित करते समय, इसके जीनोम में कई तत्वों को शामिल किया जाना चाहिए। वे हैं, लाख रिप्रेसर (लाख I) प्रोटीन के लिए एक जीन, लाख Z जीन का प्रचालक-समीपस्थ क्षेत्र, एक लाख प्रमोटर और एक बहु क्लोनिंग साइट (पॉलीलिंकर)। जब M13 के dsDNA को वैक्टर के रूप में उपयोग किया जाता है, तो इसे प्लास्मिड वेक्टर के रूप में माना जा सकता है। हालाँकि, ssDNA M13 के उपयोग से डीएनए अनुक्रमण और साइट-निर्देशित उत्परिवर्तजन में लाभ हैं।
चूंकि एम13 फेज वेक्टर में लाख क्षेत्र में कई क्लोनिंग साइट होती है, आईपीटीजी और एक्स-गैल युक्त अगर प्लेटों पर नीली/सफेद कॉलोनी स्क्रीनिंग द्वारा पुनर्संयोजित वैक्टर को आसानी से पहचाना जा सकता है। प्लेटों पर बनने वाली नीली पट्टिकाओं में पुनर्संयोजित फेज नहीं होते हैं। इसलिए, क्लोनिंग उद्देश्य के लिए इन्सर्ट वाले फेज का चयन किया जा सकता है।
चित्र 02: बैक्टीरियोफेज एम13
YAC और M13 फेज वेक्टर में क्या अंतर है?
YAC बनाम M13 फेज वेक्टर |
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| YAC एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर गुणसूत्र है जिसमें विदेशी डीएनए के एक बड़े खंड को ले जाने और खमीर कोशिकाओं के भीतर दोहराने की क्षमता है। | M13 फेज वेक्टर बैक्टीरियोफेज M13 द्वारा विकसित एक वायरल वेक्टर है जिसका उपयोग ई कोलाई में विदेशी डीएनए डालने के लिए किया जाता है। |
| उद्देश्य | |
| YACs को जीनोमिक डीएनए के बड़े टुकड़ों को यीस्ट में क्लोन करने के लिए डिज़ाइन किया गया था। | M13 फेज वैक्टर का उपयोग ई कोलाई में विदेशी डीएनए डालने के लिए किया जाता है। |
| लंबाई डालें | |
| YAC में मेगाबेस के आकार के जीनोमिक इंसर्ट (1000 kb - 2000 kb) हो सकते हैं। | आवेषण का आकार लगभग 1,500 बीपीएस है। |
| निर्माण | |
| YAC डीएनए अक्षुण्ण शुद्ध करना मुश्किल है और YAC वेक्टर सिस्टम बनाने के लिए उच्च सांद्रता की आवश्यकता होती है। | यह चक्रीय प्रकाश संश्लेषक इलेक्ट्रॉन श्रृंखला के माध्यम से होता है। |
| स्थिरता | |
| YAC अस्थिर है। | M13 फेज आसानी से निकाले जा सकते हैं। |
| आकार | |
| एंजाइम बड़े अणु होते हैं। | M13 फेज YAC से स्थिर हैं। |
सारांश - YAC बनाम M13 फेज वेक्टर
YAC एक कृत्रिम रूप से निर्मित वेक्टर प्रणाली है जो खमीर कोशिकाओं में आनुवंशिक सामग्री के बड़े खंडों को सम्मिलित करने के लिए खमीर गुणसूत्र के एक विशिष्ट क्षेत्र का उपयोग करती है।एम 13 फेज वेक्टर बैक्टीरियोफेज एम 13 से प्राप्त एक वेक्टर सिस्टम है जो ई कोलाई को मेजबान जीव के रूप में उपयोग करता है। यह YAC और M13 फेज वेक्टर के बीच मुख्य अंतर है। दोनों पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी और जीन क्लोनिंग में समान रूप से उपयोगी हैं।
