मुख्य अंतर - ब्लंट बनाम स्टिकी एंड लिगेशन
प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिअस विशिष्ट एंजाइम होते हैं जो डबल स्ट्रैंडेड डीएनए (डीएसडीएनए) को काटते हैं। उन्हें आणविक जीव विज्ञान में आणविक कैंची के रूप में भी जाना जाता है। प्रतिबंध एंजाइम डीएसडीएनए के विशिष्ट लघु अनुक्रमों को पहचानने में सक्षम हैं जिन्हें मान्यता साइटों के रूप में जाना जाता है और डबल स्ट्रैंड खोलने के लिए फॉस्फोडाइस्टर और हाइड्रोजन बॉन्ड को क्लीव करते हैं। इन एंजाइमों द्वारा दरार के परिणामस्वरूप, डीएनए के टुकड़े विभिन्न प्रकार के सिरों जैसे चिपचिपे सिरे और कुंद सिरे के साथ उत्पन्न होते हैं। डीएनए लिगेज एक एंजाइम है जिसका उपयोग आणविक जीव विज्ञान में नए बांड बनाकर डीएनए के दो आसन्न किस्में से जुड़ने के लिए किया जाता है।स्टेप को लिगेशन के रूप में जाना जाता है और डीएनए एंड लिगेट के प्रकार के अनुसार, उन्हें ब्लंट एंड लिगेशन और स्टिकी एंड लिगेशन के रूप में संदर्भित किया जा सकता है। ब्लंट और स्टिकी एंड लिगेशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि डीएनए के टुकड़ों के बीच ब्लंट एंड लिगेशन होता है जिसमें दो ब्लंट एंड होते हैं जबकि स्टिकी एंड लिगेशन 5 'और 3' ओवरहैंग के बीच होता है। कुंद अंत बंधाव की तुलना में, चिपचिपा अंत बंधन अधिक कुशल और स्थिर है।
एक कुंद अंत बंधन क्या है?
कुछ प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिअस डीएनए को विपरीत आधारों पर काट सकते हैं और कुंद अंत डीएनए टुकड़े पैदा कर सकते हैं। इन एंजाइमों को कुंद अंत कटर के रूप में जाना जाता है; वे एक भी फंसे हुए ओवरहैंगिंग बेस को छोड़े बिना सीधे प्रतिबंध स्थल के बीच में उतर जाते हैं। कुंद सिरों को नॉन-ओवरहैंगिंग एंड्स के रूप में भी जाना जाता है क्योंकि उनके सिरों पर 3 'और 5' ओवरहैंगिंग बेस नहीं होते हैं। दोनों किस्में आधार जोड़े से कुंद सिरों में समाप्त होती हैं। आम कुंद अंत काटने वाले एंजाइम EcoRV HaeIII, AluI और SmaI हैं।
कुंद अंत बंधाव दो कुंद सिरों के बीच शामिल है। यह उभरे हुए ठिकानों का बंधन नहीं है। यह बंधन चिपचिपा अंत बंधन से कम कुशल है। हालांकि, कुछ अवसरों में, ब्लंट एंड लिगेशन स्टिकी एंड लिगेशन की तुलना में अधिक फायदेमंद हो जाता है, खासकर जब पीसीआर उत्पादों को लिगेट करना। पीसीआर उत्पाद हमेशा कुंद सिरों के साथ निर्मित होते हैं। कुंद अंत बंधाव को बंधाव के लिए डीएनए में पूरक सिरों की आवश्यकता नहीं होती है।
चित्र 01: इको आरवी एंजाइम द्वारा कुंद अंत उत्पादन
स्टिकी एंड लिगेशन क्या है?
कुछ प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिअस डीएसडीएनए को काटने में सक्षम हैं, जिससे अंत में एकल-फंसे डीएनए का एक ओवरहैंगिंग टुकड़ा रह जाता है। इन सिरों को चिपचिपा या ओवरहैंगिंग सिरों के रूप में जाना जाता है। स्टिकी एंड लिगेशन दो डीएनए अंशों के बीच होता है जिसमें मैचिंग ओवरहैंग होते हैं क्योंकि चिपचिपे सिरे अयुग्मित आधारों के साथ होते हैं और बांड बनाने के लिए पूरक आधारों की आवश्यकता होती है।इसलिए, डीएनए के दोनों स्रोतों के लिए समान प्रतिबंध एंजाइम का उपयोग करना आवश्यक है ताकि मेल खाने वाले लिगेटिंग टुकड़े उत्पन्न हो सकें।
स्टिकी एंड लिगेशन अधिक कुशल है और अक्सर क्लोनिंग प्रक्रियाओं में अत्यधिक वांछनीय होता है। कई प्रतिबंध एंजाइम हैं जो चिपचिपा सिरों का उत्पादन करते हैं। वे EcoRI, BAMHI, HindIII आदि हैं।
चित्र 02: इको आरआई एंजाइम द्वारा चिपचिपा अंत उत्पादन
ब्लंट और स्टिकी एंड लिगेशन में क्या अंतर है?
ब्लंट बनाम स्टिकी एंड लिगेशन |
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| कुंद अंत बंधाव दो कुंद अंत डीएनए अंशों के बीच होता है। | चिपचिपे सिरे वाले दो मिलान डीएनए अंशों के बीच स्टिकी एंड लिगेशन होता है। |
| एंजाइम | |
| ब्लंट एंड कटर ब्लंट एंड्स का उत्पादन करते हैं। | स्टिकी एंड कटर चिपचिपे या चिपकने वाले सिरे पैदा करते हैं। |
| मिलान समाप्त होने की आवश्यकता | |
| इसे मेल खाने वाले टुकड़े या पूरक आधार की आवश्यकता नहीं है। | आधार जोड़े बनाने के लिए इसके सिरों पर पूरक आधारों की आवश्यकता होती है। |
| दक्षता | |
| यह स्टिकी एंड लिगेशन से कम कुशल है | यह कुंद अंत बंधाव से अधिक कुशल है। |
सारांश - ब्लंट बनाम स्टिकी एंड लिगेशन
प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिअस डीएसडीएनए को अलग करने और विभिन्न सिरों के साथ डीएनए टुकड़े बनाने में सक्षम हैं।वे विशिष्ट अनुक्रमों को पहचानते हैं और चिपचिपे और कुंद सिरों को बनाने वाले डीएनए को प्रतिबंधित करते हैं। चिपचिपे सिरों में टुकड़ों के अंत में अयुग्मित आधार होते हैं। कुंद सिरे एक सीधी दरार के कारण बनते हैं और उनके सिरों पर आधार जोड़े होते हैं। स्टिकी एंड लिगेशन के लिए दो पूरक एकल-फंसे डीएनए टुकड़ों की आवश्यकता होती है। कुंद अंत बंधाव किन्हीं दो कुंद अंत अंशों के बीच होता है। यह कुंद और चिपचिपा बंधन के बीच का अंतर है।
