निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि निक ट्रांसलेशन एक ऐसी प्रक्रिया है जो विभिन्न संकरण प्रतिक्रियाओं के लिए लेबल डीएनए जांच बनाती है जबकि एंड फिलिंग एक ऐसी तकनीक है जो एकल-फंसे हुए ओवरहैंग्स में न्यूक्लियोटाइड जोड़कर धुंधले टुकड़े बनाती है।
निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग आणविक जीव विज्ञान में उपयोग की जाने वाली दो तकनीकें हैं। विशिष्ट न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमों का पता लगाने के लिए संकरण के लिए जांच लेबलिंग के लिए निक अनुवाद का उपयोग किया जाता है। एंड फिलिंग का उपयोग धुंधले टुकड़े बनाने के लिए किया जाता है, जिसमें सिंगल-फंसे हुए ओवरहैंग्स के साथ चिपचिपे सिरे होते हैं। दोनों तकनीकों का बहुत महत्व है, और उन्हें नियमित रूप से आणविक अनुसंधान प्रयोगशालाओं में किया जाता है।
निक ट्रांसलेशन क्या है?
निक ट्रांसलेशन एक महत्वपूर्ण तकनीक है जिसका उपयोग विभिन्न आणविक जैविक तकनीकों जैसे ब्लॉटिंग, इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन, फ्लोरोसेंट इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन आदि के लिए लेबल प्रोब तैयार करने के लिए किया जाता है। यह डीएनए लेबलिंग की इन विट्रो विधि है। डीएनए जांच का उपयोग विशिष्ट डीएनए या आरएनए अनुक्रमों की पहचान के लिए किया जाता है। एक लेबल जांच की मदद से, न्यूक्लिक एसिड के एक जटिल मिश्रण से विशिष्ट टुकड़ों को चिह्नित या कल्पना की जा सकती है। इसलिए विभिन्न तकनीकों का उपयोग करके लेबल की गई जांच तैयार की जाती है। निक ट्रांसलेशन एक ऐसी विधि है जो DNase 1 और डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की मदद से लेबल की गई जांच का उत्पादन करती है।
चित्र 01: निक अनुवाद
निक अनुवाद प्रक्रिया DNase 1 एंजाइम गतिविधि से शुरू होती है।DNase 1 न्यूक्लियोटाइड्स के बीच फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड्स को साफ करके डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के फॉस्फेट बैकबोन में निक्स का परिचय देता है। एक बार निक बनने के बाद, न्यूक्लियोटाइड के मुक्त 3′ OH समूह का उत्पादन किया जाएगा, और डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम उस पर कार्य करेगा। डीएनए पोलीमरेज़ 1 की 5′ से 3′ एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि डीएनए स्ट्रैंड की 3′ दिशा की ओर न्यूक्लियोटाइड को हटा देती है।
साथ ही, डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की पोलीमरेज़ गतिविधि काम करती है और हटाए गए न्यूक्लियोटाइड को बदलने के लिए न्यूक्लियोटाइड्स जोड़ती है। यदि न्यूक्लियोटाइड्स को लेबल किया जाता है, तो लेबल वाले न्यूक्लियोटाइड्स द्वारा प्रतिस्थापन किया जाएगा, और यह पहचान के लिए डीएनए को चिह्नित करेगा। अंत में, इस नए संश्लेषित लेबल वाले डीएनए को विभिन्न संकरण प्रतिक्रियाओं में जांच के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
एंड फिलिंग क्या है?
एंड फिलिंग एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग आणविक जीव विज्ञान में धुँधले टुकड़े बनाने के लिए किया जाता है। प्रतिबंध पाचन ओवरहैंग के साथ टुकड़े पैदा करता है। ये टुकड़े प्लास्मिड वैक्टर में बंधने के लिए संगत नहीं हो सकते हैं।गैर-संगत सिरों को जोड़ने की अनुमति देने के लिए अक्सर वैक्टर को धुंधला कर दिया जाता है। इसलिए, पोलीमराइजेशन के लिए टेम्पलेट के रूप में ओवरहांग का उपयोग करके पूरक स्ट्रैंड में न्यूक्लियोटाइड्स को जोड़कर ओवरहैंग वाले टुकड़ों को धुंधला किया जा सकता है। इस प्रक्रिया को अंत भरने के रूप में जाना जाता है।
डीएनए पोलीमरेज़ जैसे डीएनए पोलीमरेज़ I का क्लेनो टुकड़ा और टी4 डीएनए पोलीमरेज़ एंड फिलिंग को उत्प्रेरित करते हैं। वे भरने के लिए न्यूक्लियोटाइड जोड़ते हैं (5′ → 3′) और वापस चबाते हैं (3′ → 5′)। एक बार चिपचिपे सिरे भर जाने पर, वे कुंद हो जाते हैं, और वे एक सदिश में बंधने के लिए तैयार हो जाते हैं।
इसके अलावा, डीएनए अणुओं को लेबल करने के लिए एंड फिलिंग का उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, इसका उपयोग केवल चिपचिपे सिरों वाले डीएनए अणुओं को लेबल करने के लिए किया जा सकता है। निक ट्रांसलेशन की तुलना में, एंड फिलिंग एक जेंटलर तरीका है जो शायद ही कभी डीएनए के टूटने का कारण बनता है।
निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग में क्या समानताएं हैं?
- निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग दोनों आणविक जैविक तकनीक हैं।
- इन्हें प्रोब को लेबल करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
- दोनों इन विट्रो में हैं
निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग में क्या अंतर है?
निक ट्रांसलेशन एक ऐसी तकनीक है जो हाइब्रिडाइजेशन के लिए लेबल वाले प्रोब बनाती है। इसके विपरीत, एंड फिलिंग एक ऐसी तकनीक है जो वैक्टर में बंधाव के लिए कुंद टुकड़े बनाती है। तो, यह निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, निक अनुवाद के लिए 5' से 3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि के उपयोग की आवश्यकता होती है जबकि अंत भरने के लिए 5' से 3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि की आवश्यकता नहीं होती है।
नीचे दिया गया इन्फोग्राफिक निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग के बीच के अंतर को अधिक विस्तार से बताता है।
सारांश - निक ट्रांसलेशन बनाम एंड फिलिंग
निक ट्रांसलेशन एक ऐसी विधि है जो डीएनए में रेडिओलेबेल्ड न्यूक्लियोटाइड को शामिल करती है। यह DNase 1 और E. कोलाई डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की गतिविधियों के आधार पर लेबल की गई जांच को संश्लेषित करता है। दूसरी ओर, अंत भरना, एक ऐसी तकनीक है जो कुंद टुकड़े पैदा करती है। जब टुकड़ों में चिपचिपे सिरे (एकल-फंसे हुए ओवरहैंग) होते हैं, तो उन्हें वैक्टर में लिगेट करने के लिए ब्लंटेड सिरों को बनाना आवश्यक होता है। एंड फिलिंग संगत न्यूक्लियोटाइड जोड़ता है और उन्हें बंधाव के लिए अनुकूल बनाने के लिए कुंद अंत के टुकड़े बनाता है। इस प्रकार, यह निक ट्रांसलेशन और एंड फिलिंग के बीच के अंतर को सारांशित करता है।
