मुख्य अंतर - निक ट्रांसलेशन बनाम प्राइमर एक्सटेंशन
निक ट्रांसलेशन और प्राइमर एक्सटेंशन मॉलिक्यूलर बायोलॉजी में की जाने वाली दो महत्वपूर्ण तकनीकें हैं। निक ट्रांसलेशन और प्राइमर एक्सटेंशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि निक ट्रांसलेशन प्रक्रिया अन्य संकरण तकनीकों के लिए लेबल प्रोब का उत्पादन करती है जबकि प्राइमर एक्सटेंशन विधि एक मिश्रण से एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम की पहचान करती है और एमआरएनए की अभिव्यक्ति के बारे में जानकारी का खुलासा करती है। दोनों तकनीकों का बहुत महत्व है और नियमित रूप से आणविक अनुसंधान प्रयोगशालाओं में प्रदर्शन किया जाता है।
निक ट्रांसलेशन क्या है?
निक ट्रांसलेशन एक महत्वपूर्ण तकनीक है जिसका उपयोग विभिन्न आणविक जैविक तकनीकों जैसे ब्लॉटिंग, सीटू हाइब्रिडाइजेशन, फ्लोरोसेंट इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन आदि के लिए लेबल प्रोब तैयार करने के लिए किया जाता है।यह डीएनए लेबलिंग की इन विट्रो विधि है। डीएनए जांच का उपयोग विशिष्ट डीएनए या आरएनए अनुक्रमों की पहचान के लिए किया जाता है। एक लेबल जांच की मदद से, न्यूक्लिक एसिड के एक जटिल मिश्रण से विशिष्ट टुकड़ों को चिह्नित या कल्पना की जा सकती है। इसलिए, विभिन्न तकनीकों के लिए उपयोग की जाने वाली विभिन्न तकनीकों का उपयोग करके लेबल की गई जांच तैयार की जाती है। निक ट्रांसलेशन एक ऐसी विधि है जो DNase 1 और DNA पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की मदद से लेबल वाले प्रोब तैयार करती है।
निकल अनुवाद प्रक्रिया DNase 1 एंजाइम गतिविधि से शुरू होती है। DNase 1 न्यूक्लियोटाइड्स के बीच फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड्स को साफ करके डबल स्ट्रैंडेड डीएनए के फॉस्फेट बैकबोन में निक्स का परिचय देता है। एक बार निक बनने के बाद न्यूक्लियोटाइड का 3' ओएच समूह मुक्त हो जाएगा और डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम उस पर कार्य करेगा। डीएनए पोलीमरेज़ 1 की 5' से 3' की एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि डीएनए स्ट्रैंड की 3' दिशा की ओर न्यूक्लियोटाइड को हटा देती है। इसके साथ ही, डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की पोलीमरेज़ गतिविधि काम करती है और हटाए गए न्यूक्लियोटाइड को बदलने के लिए न्यूक्लियोटाइड्स जोड़ती है।यदि न्यूक्लियोटाइड को लेबल किया गया था, तो लेबल वाले न्यूक्लियोटाइड द्वारा प्रतिस्थापन होगा और यह पहचान के लिए डीएनए को चिह्नित करेगा। इस नए संश्लेषित लेबल वाले डीएनए को आणविक जीव विज्ञान में विभिन्न संकरण प्रतिक्रियाओं में जांच के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
चित्र 01: निक अनुवाद प्रक्रिया
प्राइमर एक्सटेंशन क्या है?
प्राइमर एक्सटेंशन एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग आरएनए मिश्रण से विशिष्ट आरएनए अनुक्रम को खोजने और एमआरएनए प्रतिलेख के 5' छोर का पता लगाने के लिए किया जाता है। इसका उपयोग आरएनए की संरचना और अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है। प्राइमर एक्सटेंशन विधि लेबल वाले प्राइमरों के साथ या लेबल वाले न्यूक्लियोटाइड के साथ की जाती है। यदि लेबल किए गए प्राइमरों का उपयोग किया जाता है, तो यह उन न्यूक्लियोटाइड्स को लेबल करने की आवश्यकता को बाहर करता है जो सीडीएनए के संश्लेषण के लिए उपयोग किए जाते हैं।इस तकनीक में कई चरण होते हैं। यह नमूने से आरएनए के निष्कर्षण से शुरू होता है। फिर एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम के सीडीएनए को संश्लेषित करने के लिए आवश्यक अवयवों के साथ मिश्रण में एक लेबल ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमर जोड़ा जाता है। प्राइमर मिश्रण से पूरक अनुक्रम की घोषणा करता है। टेम्पलेट के रूप में प्राइमर एनील्ड अनुक्रम का उपयोग करते हुए, एंजाइम रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस आरएनए अनुक्रम के पूरक डीएनए (सीडीएनए) को संश्लेषित करता है। प्राइमर एनीलिंग और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन तभी होता है जब नमूने में विशिष्ट आरएनए अनुक्रम मौजूद होता है। अंत में, जब जेल वैद्युतकणसंचलन का प्रदर्शन किया जाता है, तो आरएनए अनुक्रम का आकार निर्धारित किया जा सकता है। प्राइमर एक्सटेंशन विधि द्वारा एमआरएनए (ट्रांसक्रिप्शन दीक्षा साइट) अनुक्रम के +1 बेस को ढूंढना भी आसान है। यदि अतिरिक्त प्राइमर का उपयोग किया जाता है तो नमूने में मौजूद एमआरएनए की मात्रा इस विधि द्वारा निर्धारित की जा सकती है।
चित्र 02: प्राइमर एक्सटेंशन
निक ट्रांसलेशन और प्राइमर एक्सटेंशन में क्या अंतर है?
निक ट्रांसलेशन बनाम प्राइमर एक्सटेंशन |
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| निक ट्रांसलेशन एक ऐसी प्रक्रिया है जो विभिन्न संकरण प्रतिक्रियाओं के लिए लेबल वाले डीएनए जांच बनाती है। | प्राइमर एक्सटेंशन एक तकनीक है जिसका उपयोग विशिष्ट आरएनए को खोजने या जीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। |
| प्रयुक्त एंजाइम | |
| DNase 1 और डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम का उपयोग किया जाता है। | रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम का उपयोग किया जाता है। |
| महत्व | |
| निक अनुवाद विशिष्ट डीएनए अनुक्रम के अंकन की सुविधा प्रदान करता है। | प्राइमर एक्सटेंशन विशिष्ट एमआरएनए अनुक्रम आकार और नमूने में मौजूद मात्रा का पता लगाने में सक्षम बनाता है। |
सारांश - निक ट्रांसलेशन बनाम प्राइमर एक्सटेंशन
निक अनुवाद DNase 1 और E कोलाई डीएनए पोलीमरेज़ 1 एंजाइम की गतिविधियों के आधार पर लेबल की गई जांच को संश्लेषित करने के लिए उपयोग की जाने वाली एक विधि है। यह विभिन्न संकरण तकनीकों से पहले प्रयोगशालाओं में नियोजित एक इन विट्रो विधि है। निक ट्रांसलेशन के दौरान, डीएनए पोलीमरेज़ 1 की 5'-3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि निक से आगे न्यूक्लियोटाइड को हटा देती है और डीएनए पोलीमरेज़ 1 की पोलीमरेज़ गतिविधि हटाए गए न्यूक्लियोटाइड को निक के पीछे लेबल वाले न्यूक्लियोटाइड से बदल देती है। प्राइमर एक्सटेंशन एक ऐसी विधि है जिसका उपयोग मिश्रण से एक विशिष्ट आरएनए प्रतिलेख का पता लगाने और आकार और ब्याज आरएनए की मात्रा को मापने के लिए किया जाता है। निक ट्रांसलेशन और प्राइमर एक्सटेंशन में यही अंतर है।
