मुख्य अंतर - पीसीआर प्राइमर बनाम सीक्वेंसिंग प्राइमर
आणविक जीव विज्ञान के क्षेत्र में हाल के विकास के साथ, विभिन्न आनुवंशिक तकनीकों का विकास किया गया जिसने विषय के विभिन्न तरीकों की जांच प्रक्रियाओं को आसान और सटीक बना दिया। पीसीआर और अन्य अनुक्रमण प्रक्रियाएं ऐसी दो महत्वपूर्ण तकनीकें हैं। वे विभिन्न उप-घटकों का उपयोग करते हैं। प्राइमर को पीसीआर और सीक्वेंसिंग तकनीकों दोनों के लिए प्रमुख उप-घटक माना जाता है। पीसीआर प्राइमरों का उपयोग एक विशेष डीएनए अनुक्रम के प्रवर्धन के लिए किया जाता है, जबकि अनुक्रमण प्राइमरों का उपयोग न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम के अपने विशिष्ट क्रम को प्रकट करने के इरादे से डीएनए टुकड़े को अनुक्रमित करने के संदर्भ में किया जाता है।यह पीसीआर प्राइमरों और अनुक्रमण प्राइमरों के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
पीसीआर प्राइमर क्या हैं?
पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) एक आनुवंशिक तकनीक है जिसका उपयोग आणविक जीव विज्ञान के क्षेत्र में एक विशेष डीएनए खंड की एक या कुछ प्रतियों को बढ़ाने और कई लाखों समान प्रतियां प्राप्त करने के लिए किया जाता है। एक पीसीआर प्रतिक्रिया में, प्राइमरों सहित विभिन्न घटकों का उपयोग किया जाता है। प्राइमर छोटे डीएनए स्ट्रैंड होते हैं जिनकी न्यूक्लियोटाइड लंबाई 18-25 होती है, जो उन्हें डीएनए अंशों के प्रारंभ और अंत क्षेत्र के अनुकूल बनाते हैं। प्राइमर फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर हो सकते हैं। ये प्राइमर डीएनए टुकड़े को विशिष्ट बिंदुओं पर बांधते हैं जहां यह डीएनए पोलीमरेज़ को स्थान पर विशिष्ट प्राइमर से बांधने और नए डीएनए स्ट्रैंड के संश्लेषण को आरंभ करने के लिए बनाता है।
प्राइमर का चयन पीसीआर प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण पहलू है। प्राइमर की लंबाई का चुनाव महत्वपूर्ण है। आदर्श लंबाई 18-25 न्यूक्लियोटाइड होगी।यदि लंबाई बहुत कम या बहुत लंबी है, तो प्राइमर डीएनए अनुक्रम से सटीक रूप से प्रवर्धित होने के लिए बाध्य नहीं होंगे। प्राइमर जो लंबाई में बहुत कम होते हैं, डीएनए अनुक्रम के विभिन्न स्थानों पर गैर-विशिष्ट प्राइमर एनीलिंग की ओर ले जाते हैं।
चित्र 01: पीसीआर प्राइमर
एक अच्छे प्राइमर में गुआनाइन और साइटोसिन (जीसी) की मात्रा 40-60 के बीच होनी चाहिए। पीसीआर के दौरान प्राइमर एनीलिंग तापमान और पिघलने का तापमान महत्वपूर्ण कारक हैं। पिघलने के तापमान की सही गणना की जानी चाहिए, और प्राइमर एनीलिंग तापमान पिघलने के तापमान से 5 0C कम होना चाहिए। पिघलने का तापमान 60 डिग्री सेल्सियस और 75 डिग्री सेल्सियस होना चाहिए। बहुत अधिक या बहुत कम तापमान के परिणामस्वरूप कम सक्रिय डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि होगी।
सीक्वेंसिंग प्राइमर क्या हैं?
सीक्वेंसिंग प्राइमर का उपयोग डीएनए के टुकड़े को उसकी विशिष्ट पहचान को प्रकट करने के इरादे से सीक्वेंस करने के संदर्भ में किया जाता है। अच्छे अनुक्रमण परिणाम प्राप्त करने के लिए उच्च गुणवत्ता वाले प्राइमर और टेम्पलेट महत्वपूर्ण हैं। इस प्रकार, जब प्राइमरों का चयन किया जाता है, तो वे उस विशेष क्षेत्र के लिए अद्वितीय होना चाहिए जहां हम अनुक्रम करना चाहते हैं। यह भी एक सही अभिविन्यास के साथ होना चाहिए जहां अनुक्रम आमतौर पर प्राइमरों के 3 'से 5' छोर तक उत्पन्न होते हैं। अनुक्रम में अवांछनीय आत्म-संकरण की कमी होनी चाहिए जैसे कि हेयरपिन लूप का निर्माण। इसमें गुआनाइन क्षारों का लगातार निर्माण नहीं होना चाहिए।
प्राइमर का गलनांक (Tm) अनुक्रमण की स्थितियों के लिए उपयुक्त होना चाहिए। इसलिए, यह 52oC और 74oC के बीच स्थित होना चाहिए। अनुक्रम की वांछित पूर्ण लंबाई प्राप्त करने के लिए प्राइमर के रूप में उपयोग किए जाने वाले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स की तैयारी को शुद्ध किया जाना चाहिए। यदि ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स में अशुद्धियाँ होती हैं, तो प्राइमर अनुक्रम सिग्नलिंग को विभिन्न प्राइमिंग साइटों से आरोपित किया जाएगा, और यह आधार कोशिकाओं की संख्या को भी कम करेगा।
चित्र 02: सीक्वेंसिंग प्राइमर
ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड का प्राइमरी मेल्टिंग टेम्परेचर (Tm) निर्धारित करता है कि पूरक डीएनए स्ट्रैंड एक दूसरे के साथ कितने मजबूत हैं। टीएम को थर्मोडायनामिक गणना के रूप में माना जा सकता है जहां यह डीएनए अनुक्रमों और नमक एकाग्रता जैसी कई स्थितियों पर निर्भर है। पीसीआर के दौरान टीएम महत्वपूर्ण है जहां एक प्रकार का चक्र अनुक्रमण कहा जाता है जिसका उपयोग डिडॉक्सिन्यूक्लियोटाइड-टर्मिनेटेड टुकड़ों के समूह का उत्पादन करने के लिए किया जाता है। यहां, प्राइमर जिसे अनुक्रमित किया जाता है, शुरू में वैकल्पिक रूप से annealed किया जाएगा, फिर बढ़ाया जाएगा और अंत में प्रवर्धन के लिए विकृत किया जाएगा। इसलिए, Tm मान 52oC और 74o C के बीच होना चाहिए। संश्लेषित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स डीएनए/आरएनए संश्लेषण प्रयोगशालाओं से प्राप्त किए जा सकते हैं। पसंद।डीएनए अनुक्रमण के लिए उपयोग किए जाने वाले संश्लेषण का छोटा पैमाना आमतौर पर 50 एनएमओएल होता है। इसके अलावा सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि अनुक्रमण के लिए उपयोग किए जाने वाले प्राइमरों को अशुद्धियों से मुक्त करने के लिए शुद्ध किया जाना चाहिए जो गुणवत्ता में कमी को रोकेंगे।
पीसीआर प्राइमरों और सीक्वेंसिंग प्राइमरों के बीच समानताएं क्या हैं?
- पीसीआर प्राइमर और सीक्वेंसिंग प्राइमर दोनों प्राइमर हैं जो एक लक्षित डीएनए अनुक्रम के प्रवर्धन प्रक्रिया में उपयोग किए जाते हैं।
- पीसीआर प्राइमर और सीक्वेंसिंग प्राइमर दोनों न्यूक्लियोटाइड से बने होते हैं।
- पीसीआर प्राइमर और सीक्वेंसिंग प्राइमर दोनों छोटे ओलिगोमर्स हैं।
पीसीआर प्राइमर और सीक्वेंसिंग प्राइमर में क्या अंतर है?
पीसीआर प्राइमर बनाम सीक्वेंसिंग प्राइमर |
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| पीसीआर प्राइमर छोटे डीएनए स्ट्रैंड होते हैं जिनकी न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम लंबाई 18-25 होती है जो उन्हें डीएनए अंशों के प्रारंभ और अंत क्षेत्र के अनुकूल बनाते हैं जिन्हें प्रवर्धित किया जाना है। | सीक्वेंसिंग प्राइमर छोटे ओलिगोमर्स होते हैं जिनका उपयोग डीएनए के टुकड़े को उसकी विशिष्ट पहचान को प्रकट करने के इरादे से अनुक्रमण के संदर्भ में किया जाता है। |
| समारोह | |
| पीसीआर प्राइमर का उपयोग एक विशेष डीएनए अनुक्रम के प्रवर्धन के लिए किया जाता है। | सीक्वेंसिंग प्राइमर का उपयोग डीएनए के टुकड़े को उसकी विशिष्ट पहचान को प्रकट करने के इरादे से सीक्वेंसिंग के संदर्भ में किया जाता है। |
| आवश्यक प्राइमरों की संख्या | |
| दो प्राइमर; एक फॉरवर्ड प्राइमर और एक रिवर्स प्राइमर का उपयोग पीसीआर प्राइमर के रूप में किया जाता है। | अनुक्रमण प्राइमर के रूप में केवल एक प्राइमर की आवश्यकता है। |
सारांश - पीसीआर प्राइमर बनाम सीक्वेंसिंग प्राइमर
सीक्वेंसिंग प्राइमर का उपयोग डीएनए के टुकड़े को उसकी विशिष्ट पहचान को प्रकट करने के इरादे से सीक्वेंस करने के संदर्भ में किया जाता है।प्रक्रिया को चलाने के लिए एक अनुक्रमण प्राइमर पर्याप्त होगा। अच्छे अनुक्रमण परिणाम प्राप्त करने के लिए, उच्च गुणवत्ता वाले प्राइमर और टेम्पलेट महत्वपूर्ण हैं। इस प्रकार, जब प्राइमरों का चयन किया जाता है, तो वे उस विशेष क्षेत्र के लिए अद्वितीय होना चाहिए जहां हम अनुक्रम करना चाहते हैं। पीसीआर प्राइमर 18-25 की न्यूक्लियोटाइड लंबाई के साथ छोटे डीएनए स्ट्रैंड होते हैं जो डीएनए अंशों के प्रारंभ और अंत क्षेत्र के अनुकूल होते हैं जिन्हें प्रवर्धित किया जाना है। पीसीआर प्राइमर फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर हो सकते हैं। एक अच्छे प्राइमर में गुआनाइन और साइटोसिन (जीसी) की मात्रा 40-60 के बीच होनी चाहिए। पीसीआर के दौरान प्राइमर एनीलिंग तापमान और पिघलने का तापमान महत्वपूर्ण पहलू हैं। पीसीआर प्राइमरों और सीक्वेंसिंग प्राइमरों के बीच यही अंतर है।
