पीसीआर बनाम रीयल-टाइम पीसीआर
पीसीआर या पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन आधुनिक आणविक जीव विज्ञान में एक क्रांतिकारी खोज है, जिसे पहली बार 1983 में रसायनज्ञ कैरी मुलिस द्वारा विकसित किया गया था। यह एक जटिल डीएनए में एकल अनुक्रम को विश्लेषण के लिए प्रवर्धित करने की अनुमति देता है। पीसीआर का मूल विचार यह है कि दो प्राइमर, जो एक डीएनए अनुक्रम के विपरीत किस्में के पूरक हैं, एक दूसरे की ओर उन्मुख होते हैं; प्राइमर पूरक किस्में उत्पन्न करते हैं, प्रत्येक में दूसरे प्राइमर होते हैं। इसलिए, परिणाम डीएनए के अनुरूप अनुक्रम की एक बड़ी मात्रा है जो दो प्राइमरों के बीच स्थित है। डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम का उपयोग पीसीआर में प्राइमरों को बढ़ाने के लिए किया जाता है।डीएनए पोलीमरेज़ एक थर्मोस्टेबल एंजाइम है, और इसमें टेम्प्लेट डीएनए के विकृतीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले उच्च तापमान (94 से 95 डिग्री सेल्सियस) में जीवित रहने की क्षमता है।
पीसीआर में तीन चरण शामिल हैं, अर्थात् विकृतीकरण के बार-बार चक्कर लगाना, प्राइमरों का एनीलिंग और डीएनए का संश्लेषण। इस प्रतिक्रिया को करने के लिए एक थर्मोसायकलर मशीन का उपयोग किया जाता है ताकि तापमान को जल्दी और सटीक रूप से बदलने के लिए इसे प्रोग्राम किया जा सके। पीसीआर के अनुप्रयोग आपराधिक जांच, डीएनए फिंगरप्रिंट, रोगजनकों का पता लगाना और प्रारंभिक मानव प्रजातियों के डीएनए का विश्लेषण हैं।
पारंपरिक पीसीआर क्या है?
पारंपरिक पीसीआर के तीन प्रमुख चरण हैं, अर्थात्; डीएनए प्रवर्धन चरण, पीसीआर का पृथक्करण और उत्पादों का पता लगाना। डीएनए खंडों का पृथक्करण आम तौर पर agarose gel वैद्युतकणसंचलन द्वारा किया जाता है। उत्पादों को फिर एथिडुइम ब्रोमाइड के साथ दाग दिया जाता है। अंत में, यूवी प्रकाश के तहत जैल पर बैंड के दृश्य द्वारा पता लगाया जाता है। इसलिए, पारंपरिक पीसीआर के अंतिम परिणाम संख्याओं के रूप में व्यक्त नहीं किए जाते हैं।आम तौर पर पारंपरिक पीसीआर केवल एक ही पैरामीटर का पता लगाने में सक्षम होता है।
रियल-टाइम पीसीआर क्या है?
रीयल-टाइम पीसीआर उत्पादों के प्रवर्धन का पता लगा सकता है, क्योंकि उत्पादों को संश्लेषित किया जाता है। प्रौद्योगिकी के विकास के साथ, पीसीआर एक बहुत लोकप्रिय तकनीक बन गई है, विशेष रूप से खाद्य पदार्थों में बैक्टीरिया की पहचान और पहचान के लिए। रीयल-टाइम पीसीआर फ्लोरोसेंट-पहचान क्षमता से लैस एक फ़्लोरेसेंट डाई सिस्टम और थर्मोसायकलर का उपयोग करता है।
पारंपरिक पीसीआर और रीयल-टाइम पीसीआर में क्या अंतर है?
• पारंपरिक पीसीआर में अधिक समय लगता है क्योंकि यह प्रवर्धित पीसीआर उत्पादों का विश्लेषण करने के लिए जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करता है। इसके विपरीत, रीयल-टाइम पीसीआर में कम समय लगता है क्योंकि यह प्रतिक्रिया के शुरुआती चरणों के दौरान प्रवर्धन का पता लगा सकता है।
• रीयल-टाइम पीसीआर पीसीआर के घातीय वृद्धि चरण में डेटा एकत्र करता है जबकि पारंपरिक पीसीआर प्रतिक्रिया के अंतिम बिंदु पर डेटा एकत्र करता है।
• पारंपरिक पीसीआर के अंतिम बिंदु परिणाम बहुत सटीक नहीं हो सकते हैं, लेकिन रीयल-टाइम पीसीआर के परिणाम बहुत सटीक होते हैं।
• पारंपरिक पीसीआर की तुलना में रीयल-टाइम पीसीआर अधिक संवेदनशील है।
• पारंपरिक पीसीआर का रिज़ॉल्यूशन बहुत खराब होता है जबकि रीयल-टाइम पीसीआर उच्च रिज़ॉल्यूशन के कारण बहुत कम बदलावों का पता लगा सकता है।
• पारंपरिक पीसीआर के एंड पॉइंट डिटेक्शन में कम डायनेमिक रेंज होती है जबकि रियल-टाइम पीसीआर डिटेक्शन में वाइड डायनेमिक रेंज होती है।
• पारंपरिक पीसीआर के विपरीत, रीयल-टाइम पीसीआर में स्वचालित पहचान तकनीक पाई जाती है।
• पारंपरिक पीसीआर वास्तविक समय पीसीआर की तुलना में अत्यधिक परिष्कृत और श्रम गहन है।
• रीयल-टाइम पीसीआर के विपरीत, पारंपरिक पीसीआर मृत और जीवित बैक्टीरिया के बीच भेदभाव नहीं कर सकता है।
• उत्पादों का पता लगाने के लिए रीयल-टाइम पीसीआर फ्लोरोसेंट डाई सिस्टम का उपयोग करता है जबकि पारंपरिक पीसीआर एथिडियम ब्रोमाइड और यूवी लाइट का उपयोग agarose जेल माध्यम में बैंड की कल्पना करने के लिए करता है।
