प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच मुख्य अंतर यह है कि प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक एकल एंटीबॉडी का उपयोग करता है जो ब्याज के लक्ष्य के खिलाफ काम करता है जबकि अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस ब्याज के लक्ष्य को लेबल करने के लिए दो एंटीबॉडी का उपयोग करता है।
इम्युनोफ्लोरेसेंस या सेल इमेजिंग एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग फ्लोरोफोर के साथ एक विशिष्ट लक्ष्य प्रतिजन को लेबल करने के लिए किया जाता है। यहां, फ्लोरोफोर एक फ्लोरोसेंट रासायनिक यौगिक है जो प्रकाश उत्तेजना पर प्रकाश को फिर से उत्सर्जित कर सकता है। जब एक फ्लोरोफोर लक्ष्य प्रतिजन के साथ बांधता है, तो यह नमूने में लक्ष्य अणु का पता लगाने की अनुमति देता है। आगे इसका वर्णन करने के लिए, जब एक एंटीजन एक विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बांधता है, तो इसे फ्लोरोफोर्स के साथ संयुग्मित किया जा सकता है।इसलिए, प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन करने पर नमूने में लक्ष्य प्रतिजन की उपस्थिति का पता लगाना आसान होता है।
इसके अलावा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस दो प्रकार के होते हैं; प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस। प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच का अंतर मुख्य रूप से प्रयुक्त एंटीबॉडी की संख्या और फ्लोरोफोर संयुग्मन में निहित है। यही है, प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में, फ्लोरोफोर सीधे प्राथमिक एंटीबॉडी से संयुग्मित होता है जबकि अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में, फ्लोरोफोर द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होता है।
डायरेक्ट इम्यूनोफ्लोरेसेंस क्या है?
इम्युनोफ्लोरेसेंस विशिष्ट लक्ष्य प्रतिजनों का पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करता है। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस दो प्रकार के इम्यूनोफ्लोरेसेंस में से एक है। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में, एक एकल एंटीबॉडी (प्राथमिक एंटीबॉडी) शामिल होता है और फ्लोरोफोर सीधे प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होता है। लक्ष्य प्रतिजन के साथ एंटीबॉडी को बांधने पर, फ्लोरोफोरे प्रतिदीप्ति का उत्सर्जन करता है जिसे एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप द्वारा पता लगाया जा सकता है।
चित्रा 01: प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस
हालांकि, प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक महंगी विधि है क्योंकि प्राथमिक संयुग्मित एंटीबॉडी द्वितीयक एंटीबॉडी की तुलना में महंगे हैं। फिर भी, इसमें एक अतिरिक्त कदम शामिल नहीं है, इसलिए एक छोटी तकनीक। इसके अलावा, प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में गैर-विशिष्ट बाइंडिंग कम हो जाती हैं। इसलिए, प्रजातियों की क्रॉस-रिएक्टिविटी कम है। लेकिन पता लगाने में, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस की तुलना में प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस की संवेदनशीलता कमजोर होती है।
अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस क्या है?
अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस दूसरे प्रकार का इम्यूनोफ्लोरेसेंस है जिसमें लक्ष्य प्रतिजन के लेबलिंग में प्राथमिक और द्वितीयक एंटीबॉडी जैसे दो प्रकार के एंटीबॉडी शामिल होते हैं।इस विधि में, फ्लोरोफोर द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होता है। इसलिए, इस तकनीक में एक अतिरिक्त चरण शामिल है।
चित्रा 02: इम्यूनोफ्लोरेसेंस
हालांकि, इस पद्धति में संवेदनशीलता अधिक है क्योंकि कई फ्लोरोफोर्स को द्वितीयक एंटीबॉडी में संयुग्मित किया जा सकता है और यह पता लगाना आसान बनाता है। इसके अलावा, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस इस तथ्य के कारण कम खर्चीला है कि माध्यमिक एंटीबॉडी का संयुग्मन कम खर्चीला और आसान है। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस की तुलना में, अप्रत्यक्ष विधि में प्रजातियों की क्रॉस-रिएक्टिविटी अधिक होती है।
प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच समानताएं क्या हैं?
- वे दो प्रकार की इम्यूनोफ्लोरेसेंस तकनीक हैं।
- प्राथमिक एंटीबॉडी और फ्लोरोफोर दोनों विधियों में शामिल हैं।
- साथ ही, एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया दोनों तरीकों से होती है।
- इसके अलावा, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस दोनों एंटीजन का पता लगाने के लिए एक फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप का उपयोग करते हैं।
प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में क्या अंतर है?
इम्युनोफ्लोरेसेंस इस्तेमाल किए गए एंटीबॉडी के साथ फ्लोरोफोर संयुग्मन के आधार पर प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष हो सकता है। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में, फ्लोरोफोर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होता है, जो कि इस तकनीक में शामिल एकल एंटीबॉडी है। इसके विपरीत, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में, फ्लोरोफोर द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित होता है, जो तकनीक में शामिल दो प्रकार के एंटीबॉडी में से एक है। इसलिए, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच मुख्य अंतर एंटीबॉडी प्रकार है जो फ्लोरोफोर के साथ संयुग्मित होता है।
निम्नलिखित इन्फोग्राफिक प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच अंतर की तुलना प्रदान करता है।
सारांश - प्रत्यक्ष बनाम अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस
इम्युनोफ्लोरेसेंस एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग नमूने में विशिष्ट एंटीजन की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। यह तकनीक विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करती है। इसलिए, इसमें एंटीबॉडी फ्लोरोफोरस के साथ मिलकर एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके उनका पता लगाते हैं। इसके अलावा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस दो प्रकार के होते हैं, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में एक एकल एंटीबॉडी और फ्लोरोफोर सीधे इस एंटीबॉडी से संयुग्मित होते हैं। अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस में दो एंटीबॉडी शामिल हैं; प्राथमिक और माध्यमिक और fluorophore माध्यमिक एंटीबॉडी के लिए संयुग्मित।चूंकि कई माध्यमिक एंटीबॉडी एक प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ बंध सकते हैं और कई फ्लोरोफोर्स माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ संयुग्मित हो सकते हैं, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रत्यक्ष विधि की तुलना में अधिक संवेदनशील तरीका है। इसके अलावा, अप्रत्यक्ष विधि प्रत्यक्ष विधि की तुलना में कम खर्चीली है। इस प्रकार, यह प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस के बीच का अंतर है।
