मुख्य अंतर - वार्म बनाम कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन
वार्म और कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन दो तरीके हैं जिनका उपयोग पशु कोशिका संवर्धन में कोशिकाओं के एंजाइमी पृथक्करण में किया जाता है। गर्म और ठंडे ट्रिप्सिनाइजेशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर, जैसा कि नाम से पता चलता है, उस तापमान पर निर्भर करता है जिस पर सेल्युलर डिसएग्रीगेशन के लिए ट्रिप्सिन जोड़ा जाता है। गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन उच्च तापमान स्थितियों (36.5 - 37 0C) के तहत होता है जबकि कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन कम तापमान की स्थिति में होता है।
पशु कोशिकाओं के प्राथमिक कोशिका संवर्धन की प्रक्रिया के दौरान, तीन मुख्य विधियों का उपयोग किया जाता है और सफल साबित हुई हैं।तीन विधियों में कोशिकाओं का यांत्रिक पृथक्करण, कोशिकाओं का एंजाइमैटिक पृथक्करण और प्राथमिक खोज तकनीक शामिल हैं। कोशिकाओं के एंजाइमैटिक विघटन से कोशिकाओं का अलगाव होता है और यह प्रोटीन-अपमानजनक एंजाइम ट्रिप्सिन द्वारा किया जाता है। इसलिए, इस प्रक्रिया को ट्रिप्सिनाइजेशन के रूप में जाना जाता है। ट्रिप्सिनाइजेशन दो अलग-अलग परिस्थितियों में किया जा सकता है, अर्थात् वार्म ट्रिप्सिनाइजेशन और कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन। गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन 36.5 - 37 0C के तापमान पर गर्म परिस्थितियों में ट्रिप्सिन के साथ कोशिकाओं के उपचार की विधि है। कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन ट्रिप्सिन उपचार की प्रक्रिया है जो ठंडी परिस्थितियों में होती है, अधिमानतः बर्फ में बहुत कम तापमान बनाए रखती है।
वार्म ट्रिप्सिनाइजेशन क्या है?
सेल्युलर घटकों को अलग करने के लिए ट्राइप्सिनाइजेशन किया जा सकता है ताकि प्राथमिक सेल कल्चर का उत्पादन करने के लिए कोशिकाओं को अलग किया जा सके। ट्रिप्सिन एक प्रोटीन अवक्रमण एंजाइम है, और ट्रिप्सिनाइजेशन में प्रयुक्त एंजाइम मिश्रण या तो एक कच्चा अर्क या एक शुद्ध उत्पाद हो सकता है।कच्चे अर्क को प्रोटीन विश्लेषण और कोशिका विघटन में अधिक कुशल कहा जाता है क्योंकि इसमें अन्य अपक्षयी एंजाइम होते हैं।
गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन सेल डिसएग्रीगेशन के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला एंजाइमेटिक तरीका है जो उच्च तापमान की स्थिति में होता है। ट्रिप्सिनाइजेशन द्वारा उपचार से पहले, वांछित ऊतक को छोटे टुकड़ों में काट दिया जाता है। यह आसान पृथक्करण प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाता है। कटा हुआ ऊतक तब एक विशेष मीडिया में धोया जाता है जिसे विच्छेदन बेसल नमक माध्यम के रूप में जाना जाता है।
धोने के चरण के पूरा होने पर, कोशिकाओं को सक्रिय एंजाइम युक्त एक फ्लास्क में बदल दिया जाता है, जो कि ट्रिप्सिन है। चूंकि इस तकनीक का तात्पर्य एक गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन प्रोटोकॉल से है, ट्रिप्सिन को लगभग चार घंटे के लिए लगभग 37 0C तापमान पर रखा जाता है।
चित्र 01: ट्रिप्सिन
प्रोटोकॉल की आसानी के लिए और पृथक्करण प्रक्रिया को गति देने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन विधियों का उपयोग करके सामग्री को मिश्रित और उत्तेजित किया जाता है। एक बार अनुशंसित समय प्राप्त हो जाने के बाद, कोशिकाओं को सतह पर तैरनेवाला से प्राप्त किया जा सकता है। सतह पर तैरनेवाला से प्राप्त कोशिकाओं को तब एक विशेष तापमान और समय पर इनक्यूबेट किया जाता है।
कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन क्या है?
कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन एक अन्य प्रकार का ट्रिप्सिनाइजेशन है जो ठंडी परिस्थितियों में होता है। इस तकनीक में, कटे हुए और धोए गए कोशिकाओं को बर्फ पर शीशियों में रखा जाता है और फिर ट्रिप्सिन से भिगोया जाता है। भिगोने की अवधि अधिक लंबी होती है - लगभग 6-24 घंटे।
भिगोने की प्रक्रिया पूरी होने के बाद, सेल लाइसेट से ट्रिप्सिन को हटा दिया जाता है, और ऊतक के टुकड़ों को 37 0C पर लगभग 20-30 मिनट के लिए और इनक्यूबेट किया जाता है। ऊतक मिश्रण के बार-बार पाइपिंग द्वारा कोशिकाओं का पृथक्करण लाया जाता है।यह कोशिकाओं को झिल्ली से अलग करने और सतह पर तैरनेवाला में आने की अनुमति देगा। एक बार जब कोशिकाएं सतह पर तैरती हैं, तो उन्हें एक वांछित तापमान और समय अवधि में ऊष्मायन और विकसित किया जाता है।
कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन विधि के कई फायदे हैं
- व्यवहार्य कोशिकाओं की उच्च उपज के रूप में कोशिका क्षति कम से कम हो जाती है। केंद्रापसारक चरणों का उपयोग न करके कोशिका क्षति को कम किया जाता है।
- अत्यधिक सुविधाजनक तरीका।
- कम श्रमसाध्य।
कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन विधि की मुख्य सीमा यह है कि एक बार में बड़ी मात्रा में उपयोग नहीं किया जा सकता है।
गर्म और ठंडे ट्रिप्सिनाइजेशन के बीच समानताएं क्या हैं?
- गर्म और ठंडे दोनों ट्रिप्सिनाइजेशन प्रक्रियाएं कोशिकाओं के पृथक्करण के लिए एंजाइम ट्रिप्सिन का उपयोग करती हैं।
- कोशिकाओं के पृथक्करण के लिए सेल कल्चर प्रक्रियाओं में गर्म और ठंडे दोनों ट्रिप्सिनाइजेशन प्रक्रियाओं का उपयोग किया जाता है।
- गर्म और ठंडे दोनों ट्रिप्सिनाइजेशन उपचार प्रक्रियाओं में, कोशिकाओं को सतह पर तैरनेवाला से प्राप्त किया जाता है।
गर्म और ठंडे ट्रिप्सिनाइजेशन में क्या अंतर है?
वार्म बनाम कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन |
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| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन 36.5 - 37 के तापमान पर गर्म परिस्थितियों में ट्रिप्सिन के साथ कोशिकाओं के उपचार की विधि है 0। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन ट्रिप्सिन उपचार की प्रक्रिया है जो ठंडी परिस्थितियों में होती है, अधिमानतः बर्फ में बहुत कम तापमान बनाए रखते हैं। |
| प्रोटोकॉल | |
| कटे हुए टिश्यू के टुकड़े 37 0C पर लगातार पूरी प्रक्रिया में बने रहते हैं। | कटे हुए टिश्यू के टुकड़ों को शुरू में बर्फ के ठंडे तापमान पर रखा जाता है और फिर 37 0 पर बनाए रखा जाता है। |
| तापमान | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन 36.5 - 37 पर होता है 0 | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन बर्फ के ठंडे तापमान पर होता है। |
| समय की खपत | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन की पूरी प्रक्रिया (लगभग 4 घंटे) में कम समय लगता है। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन के लिए अधिक समय (लगभग 6 - 24 घंटे) की आवश्यकता होती है। |
| व्यवहार्य कोशिकाओं की उपज | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन में कम। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन में उच्च। |
| सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन में कोशिकाओं को अलग करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन की आवश्यकता होती है। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन में सेंट्रीफ्यूजेशन की आवश्यकता नहीं होती है। |
| ट्रिप्सिनाइजेशन के लिए प्रारंभिक ऊतक मात्रा | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन में ऊतक की अधिक मात्रा का उपयोग किया जा सकता है। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन में ऊतक की थोड़ी मात्रा का उपयोग किया जा सकता है। |
| सेल क्षति | |
| गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन में सेंट्रीफ्यूजेशन के कारण उच्च। | कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन के कारण कम। |
सारांश - वार्म बनाम कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन
ट्रिप्सिनाइजेशन सेल संवर्धन प्रक्रिया के दौरान प्राथमिक सेल संस्कृतियों को अलग करने और तैयार करने के लिए प्रोटीन-डिग्रेडिंग एंजाइम ट्रिप्सिन का उपयोग करने की विधि है। प्रक्रिया के दौरान उपयोग किए गए तापमान के आधार पर ट्रिप्सिनाइजेशन की दो मुख्य तकनीकें हैं। वे गर्म और ठंडे ट्रिप्सिनाइजेशन हैं। गर्म ट्रिप्सिनाइजेशन 37 0C पर किया जाता है जबकि कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन बर्फ-ठंडी परिस्थितियों में किया जाता है।हालांकि कोल्ड ट्रिप्सिनाइजेशन को पूरा होने में अधिक समय लगता है, लेकिन कहा जाता है कि इसमें व्यवहार्य कोशिकाओं की अधिक उपज होती है। यह इस तथ्य के कारण है कि ठंड ट्रिप्सिनाइजेशन में सेल क्षति को कम किया जाता है क्योंकि यह जोरदार सेंट्रीफ्यूजेशन चरणों का उपयोग नहीं करता है। गर्म और ठंडे ट्रिप्सिनाइजेशन में यही अंतर है।
