मुख्य अंतर - नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम नायलॉन झिल्ली
आणविक जीव विज्ञान में डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के मिश्रण से विशिष्ट अनुक्रमों का पता लगाने के लिए ब्लॉटिंग एक महत्वपूर्ण तकनीक है। यह धब्बा नामक झिल्ली का उपयोग करके किया जाता है। ब्लोटिंग की विभिन्न तकनीकें हैं जैसे उत्तरी, दक्षिणी और पश्चिमी सोख्ता। ब्लॉटिंग प्रक्रिया के लिए उचित झिल्ली का चयन सावधानी से किया जाना चाहिए ताकि गैर-विशिष्ट बंधन और गलत पहचान को रोका जा सके। नाइट्रोसेल्यूलोज, नायलॉन और पीवीडीएफ आमतौर पर सोख्ता तकनीकों में झिल्ली का उपयोग किया जाता है। उनकी अलग-अलग विशेषताएं हैं। नाइट्रोसेल्यूलोज और नायलॉन झिल्ली के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में उच्च प्रोटीन स्थिरीकरण क्षमता होती है जबकि नायलॉन झिल्ली में उच्च न्यूक्लिक एसिड स्थिरीकरण क्षमता होती है।हालांकि, दोनों प्रकार की झिल्लियों का उपयोग अक्सर सोख्ता तकनीक में किया जाता है।
नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली क्या है?
नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन ब्लॉटिंग तकनीकों में आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला झिल्ली फिल्टर है। इसमें उच्च प्रोटीन बाध्यकारी क्षमता है। इसलिए, पश्चिमी सोख्ता तकनीक में नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली सभी संकरण तकनीकों के अनुकूल हैं और बिना किसी हस्तक्षेप के बेहतर बाध्यकारी क्षमता दिखाते हैं। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली प्रकृति में स्वाभाविक रूप से हाइड्रोफिलिक हैं। वे अणुओं के साथ हाइड्रोफिलिक बातचीत करते हैं और उन्हें झिल्ली पर कुशलता से स्थिर कर देते हैं। वाणिज्यिक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली दो छिद्र आकारों में उपलब्ध हैं: 0.45 और 0.2 माइक्रोन।
चित्र 01: पश्चिमी सोख्ता में प्रयुक्त नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली
नायलॉन मेम्ब्रेन क्या है?
नायलॉन झिल्ली एक अन्य प्रकार की व्यावसायिक झिल्ली है जिसका उपयोग सोख्ता तकनीक में किया जाता है। यह वैकल्पिक रूप से दक्षिणी और उत्तरी सोख्ता के लिए नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के साथ प्रयोग किया जाता है। डीएनए के साथ बंधन के लिए उनकी उच्च आत्मीयता के कारण नाइट्रोसेल्यूलोज की तुलना में नायलॉन झिल्ली दक्षिणी सोख्ता के लिए आदर्श हैं। नायलॉन झिल्ली की कई अनूठी विशेषताओं के कारण, शोधकर्ता आमतौर पर नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के बजाय दक्षिणी और उत्तरी सोख्ता के लिए नायलॉन झिल्ली का उपयोग करते हैं। नाइट्रोसेल्यूलोज के विपरीत, नायलॉन झिल्ली को स्ट्रिपिंग और रिप्रोबिंग के लिए भी अनुशंसित किया जाता है।
चित्र 02: दक्षिणी सोख्ता के लिए प्रयुक्त नायलॉन झिल्ली
नाइट्रोसेल्यूलोज और नायलॉन मेम्ब्रेन में क्या अंतर है?
नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम नायलॉन झिल्ली |
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| नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली भंगुर होती है। | नायलॉन झिल्ली कम भंगुर होती है। |
| हैंडलिंग | |
| उन्हें संभालना मुश्किल है। | उन्हें संभालना आसान है। |
| पुन: जांच | |
| असमर्थित नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्लियों की दोबारा जांच करना मुश्किल है। | नायलॉन मेम्ब्रेन से दोबारा जांच करना आसान है। |
| विभिन्न भंडारण स्थितियों के साथ संगतता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्लियों में विभिन्न भंडारण स्थितियों को झेलने की क्षमता कम होती है। | नायलॉन झिल्ली विभिन्न भंडारण स्थितियों के लिए अधिक मजबूती से प्रतिक्रिया करती है। |
| उपयोग | |
| प्रीवेटिंग आवश्यक है। | नायलॉन मेम्ब्रेन के लिए प्रीवेटिंग की आवश्यकता नहीं होती है। |
| हाइड्रोफिलिक प्रकृति | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली प्रकृति में हाइड्रोफिलिक हैं लेकिन नायलॉन झिल्ली की तुलना में कम हाइड्रोफिलिक हैं। | वे प्रकृति में अत्यधिक हाइड्रोफिलिक हैं। |
| स्थिरीकरण क्षमता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्लियों में न्यूक्लिक एसिड के प्रति कम आत्मीयता होती है। लेकिन इसमें प्रोटीन के लिए उच्च आत्मीयता है। | नायलॉन झिल्ली में नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली की तुलना में न्यूक्लिक एसिड के साथ उच्च बाध्यकारी क्षमता होती है। |
सारांश – नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम नायलॉन झिल्ली
नाइट्रोसेल्यूलोज और नायलॉन झिल्ली विशेष चादरें हैं जिनका उपयोग ब्लोटिंग तकनीक में जेल पर बैंडिंग पैटर्न को पुन: पेश करने के लिए किया जाता है।वे झिल्ली पर स्थिर करके मिश्रण से एक विशिष्ट अनुक्रम या प्रोटीन का पता लगाने की संभावना को सक्षम करते हैं। एक बार जब अणु झिल्ली पर स्थिर हो जाते हैं, तो इसे लेबल जांच के साथ संकरण विश्लेषण के लिए एक सब्सट्रेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली का उपयोग आमतौर पर पश्चिमी सोख्ता तकनीक में प्रोटीन का पता लगाने के लिए किया जाता है क्योंकि प्रोटीन के साथ इसकी उच्च बाध्यकारी आत्मीयता होती है। नायलॉन झिल्ली का उपयोग अक्सर दक्षिणी और उत्तरी सोख्ता के लिए किया जाता है। यह नाइट्रोसेल्यूलोज और नायलॉन झिल्ली के बीच का अंतर है।
