मुख्य अंतर - नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम पीवीडीएफ
वेस्टर्न ब्लॉटिंग एक ऐसी विधि है जो प्रोटीन के नमूने से विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने और मात्रा का ठहराव करने की अनुमति देती है। तकनीक की विश्वसनीयता जेल से प्रोटीन के अवशोषण के लिए सही झिल्ली के चयन पर निर्भर करती है। सूक्ष्म झिल्लियों के विभिन्न प्रकार होते हैं। नाइट्रोसेल्यूलोज और पीवीडीएफ झिल्ली दो ऐसी झिल्ली हैं जिन्हें शोधकर्ताओं ने अन्य प्रकार की झिल्लियों की तुलना में उनके विशेष गुणों के कारण पसंद किया है। पश्चिमी सोख्ता में नाइट्रोसेल्यूलोज या पीवीडीएफ के बीच चयन भी एक और चुनौती है। नाइट्रोसेल्यूलोज और पीवीडीएफ दोनों में उच्च प्रोटीन अवशोषण क्षमता होती है।नाइट्रोसेल्यूलोज और पीवीडीएफ झिल्ली के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में एंटीबॉडी को हटाने और एंटीबॉडी रिप्रोबिंग के लिए झिल्ली का पुन: उपयोग करने की क्षमता नहीं होती है, जबकि पीवीडीएफ झिल्ली में स्ट्रिपिंग और पुन: उपयोग करने की क्षमता होती है।
नाइट्रोसेल्यूलोज क्या है?
नाइट्रोसेल्यूलोज सेल्युलोज को नाइट्रिक एसिड से उपचारित करके निर्मित एक बहुलक है और इसका उपयोग आणविक जीव विज्ञान में सूक्ष्म झिल्लियों को बनाने के लिए किया जाता है, विशेष रूप से दक्षिणी, उत्तरी और पश्चिमी सोख्ता जैसी ब्लॉटिंग तकनीकों के लिए। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के ताकना आकार 3 से 20 माइक्रोन तक होते हैं। नाइट्रोसेल्यूलोज माइक्रोपोरस झिल्ली झिल्ली की सतह पर होने वाली इम्यूनोकेमिकल प्रतिक्रिया का पता लगाने की सुविधा प्रदान करती है। इसलिए, नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली का उपयोग अक्सर प्रोटीन के स्थिरीकरण और पश्चिमी सोख्ता में विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने के लिए किया जाता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली ग्लाइकोप्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को भी स्थिर कर सकती है।
नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली कई विशेषताओं के कारण पार्श्व प्रवाह परख में पसंद की जाती है।नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली उच्च सांद्रता में प्रोटीन को अवशोषित करती है। झिल्ली को गीला करने के लिए प्रयुक्त विलायक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली प्रोटीन अवशोषण को कम नहीं करता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली को आसानी से वांछित जेल आकार में काटा जा सकता है और जेल से प्रोटीन को विद्युत या केशिका स्थानांतरण द्वारा झिल्ली में स्थानांतरित किया जा सकता है। नाइट्रोसेल्यूलोज उच्च बाध्यकारी क्षमता वाले झिल्ली के माध्यम से प्रोटीन के तेज प्रवाह की अनुमति देता है। नाइट्रोसेल्यूलोज हैंडलिंग की बेहतर ताकत दिखाता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली की एक और विशेष विशेषता यह है कि इसे विभिन्न प्लास्टिक बैकिंग्स पर आसानी से गैर-विलायक जल प्रतिरोधी चिपकने से चिपकाया जा सकता है।
चित्र 01: पश्चिमी सोख्ता के लिए नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली
पीवीडीएफ क्या है?
पॉलीविनाइलिडीन डिफ़्लुओराइड (पीवीडीएफ) फ्लोरोपॉलीमर है जो विनाइलिडीन डिफ़्लुओराइड के पोलीमराइज़ेशन द्वारा निर्मित होता है और इसमें प्रोटीन की उच्च स्थिरीकरण क्षमता होती है।इसलिए, पीवीडीएफ से बने सूक्ष्म झिल्लियों का उपयोग पश्चिमी सोख्ता तकनीकों में प्रोटीन के मिश्रण से विशिष्ट प्रोटीन का विश्लेषण करने के लिए किया जाता है। पीवीडीएफ झिल्ली का उपयोग अमीनो एसिड विश्लेषण और प्रोटीन अनुक्रमण के लिए भी किया जा सकता है। नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के ऊपर PVDF झिल्ली की सबसे महत्वपूर्ण विशेषता यह है कि इसे आसानी से एंटीबॉडी से अलग किया जा सकता है और बाद में एंटीबॉडी जांच के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है।
पीवीडीएफ झिल्ली नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली से अधिक मोटी होती है; इसलिए, पुन: उपयोग के दौरान नुकसान के लिए अधिक प्रतिरोधी। PVDF झिल्ली अत्यधिक हाइड्रोफोबिक हैं। इसलिए, उपयोग करने से पहले उन्हें मेथनॉल या आइसोप्रोपेनॉल में भिगोना चाहिए।
नाइट्रोसेल्यूलोज और पीवीडीएफ में क्या अंतर है?
नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम पीवीडीएफ |
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| नाइट्रोसेल्यूलोज सेल्युलोज से बना बहुलक है। | PVDF एक फ्लोरोपॉलीमर है जो विनाइलिडीन डिफ़्लुओराइड के पोलीमराइज़ेशन द्वारा निर्मित होता है। |
| मेम्ब्रेन पोयर साइज | |
| विशिष्ट रोमछिद्रों का आकार 0.1, 0.2 या 0.45μ है | विशिष्ट रोमछिद्रों का आकार 0.1, 0.2 या 0.45μm है |
| प्रोटीन बंधन क्षमता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज की प्रोटीन बाध्यकारी क्षमता 80 से 100 μg/cm2 है। | पीवीडीएफ की प्रोटीन बाध्यकारी क्षमता 170 से 200 माइक्रोग्राम/सेमी2 है। |
| संवेदनशीलता | |
| पीवीडीएफ की तुलना में इसकी संवेदनशीलता कम है। | इसमें उच्च संवेदनशीलता है। |
| कम व्यक्त प्रोटीन का पता लगाना | |
| चूंकि नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्लियों में संवेदनशीलता कम होती है, इसलिए यह कम व्यक्त प्रोटीन का पता लगाने के लिए उपयुक्त नहीं है। | यह इसकी उच्च संवेदनशीलता के कारण कम व्यक्त प्रोटीन का पता लगाने के लिए अधिक उपयुक्त है। |
| पृष्ठभूमि शोर | |
| इसका बैकग्राउंड नॉइज़ कम है | इसका बैकग्राउंड शोर अधिक होता है। |
| प्रोटीन के साथ बातचीत | |
| प्रोटीन अणु हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के माध्यम से नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली से बंधते हैं। | प्रोटीन हाइड्रोफोबिक और द्विध्रुवीय अंतःक्रियाओं के माध्यम से पीवीडीएफ झिल्ली से बंधते हैं। |
| झिल्ली की प्रकृति | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज भंगुर और नाजुक होता है। हालांकि, नाइट्रोसेल्यूलोज के संस्करण उपलब्ध हैं, और वे प्रतिरोधी हैं। | PVDF अधिक टिकाऊ है और इसमें उच्च रासायनिक प्रतिरोध है। |
| पट्टी और पुन: उपयोग करने की क्षमता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज को सिग्नल खोए बिना स्ट्रिपिंग और रीप्रोबिंग में कठिनाई हो सकती है। | PVDF अनुप्रयोगों की पुन: जांच और अनुक्रमण के लिए आदर्श है। |
| उपयुक्तता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज कम आणविक भार प्रोटीन का पता लगाने के लिए आदर्श है। | पीवीडीएफ उच्च आणविक भार प्रोटीन का पता लगाने के लिए अधिक उपयुक्त है। |
| अन्य उपयोग | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज का उपयोग न्यूक्लिक एसिड विश्लेषण और डॉट/स्लॉट ब्लॉटिंग के लिए किया जा सकता है। | पीवीडीएफ का उपयोग प्रोटीन अनुक्रमण और ठोस चरण परख प्रणालियों के लिए किया जा सकता है। |
| लागत | |
| यह PVDF झिल्लियों से सस्ता है। | यह नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली से अधिक महंगा है। |
| पूर्व गीला करने की आवश्यकता | |
| नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली को मेथनॉल से भिगोने की आवश्यकता नहीं होती | पीवीडीएफ झिल्ली को मेथनॉल के साथ पूर्व-भिगोने की आवश्यकता होती है। |
सारांश – नाइट्रोसेल्यूलोज बनाम पीवीडीएफ
नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पार्श्व प्रवाह परख के लिए व्यावसायिक रूप से उपयोग की जाने वाली पहली झिल्ली थी। इनमें प्रोटीन को अवशोषित करने की उच्च क्षमता होती है। इसलिए, पश्चिमी सोख्ता में नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली का उपयोग किया जाता है। PVDF एक अन्य प्रकार की झिल्ली है जिसका उपयोग पश्चिमी सोख्ता में किया जाता है और इसमें उच्च प्रोटीन अवशोषण क्षमता भी होती है। प्रोटीन विश्लेषण के लिए पश्चिमी सोख्ता में दोनों प्रकार का उपयोग किया जाता है। हालांकि, पीवीडीएफ झिल्ली में अधिक विशेष गुण होते हैं, जो उन्हें पश्चिमी सोख्ता के लिए नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली की तुलना में अधिक उपयुक्त बनाते हैं। लेकिन, नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली कम आणविक भारित प्रोटीन का पता लगाने के लिए अधिक उपयुक्त हैं, पीवीडीएफ झिल्ली उच्च आणविक भारित प्रोटीन का पता लगाने के लिए अधिक उपयुक्त हैं।यह नाइट्रोसेल्यूलोज और PVDF झिल्लियों के बीच का अंतर है।
