मुख्य अंतर - क्लोनिंग बनाम सबक्लोनिंग
क्लोनिंग और सबक्लोनिंग आणविक जैविक प्रक्रियाएं हैं जो आनुवंशिक रूप से समान कोशिकाओं या जीवों को डीएनए या जीन को प्रभावित करती हैं जो रुचि के हैं। क्लोनिंग एक ऐसी तकनीक है जिसमें रुचि रखने वाले जीन या डीएनए को एक वेक्टर में सम्मिलित करना, एक मेजबान जीवाणु के भीतर इसकी प्रतिकृति, और कोशिकाओं या जीवों का उत्पादन शामिल है जो आनुवंशिक मेकअप की सटीक प्रतियां हैं। सबक्लोनिंग एक ऐसी तकनीक है जिसमें रुचि के जीन को सम्मिलित करना शामिल है, जो पहले से ही एक वेक्टर में, एक द्वितीयक वेक्टर में डाला जाता है, एक मेजबान जीवाणु के भीतर इसकी प्रतिकृति, और कोशिकाओं या जीवों की आनुवंशिक रूप से समान प्रतियों का उत्पादन होता है।क्लोनिंग और सबक्लोनिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि, क्लोनिंग में, ब्याज की जीन, एक बार एक वेक्टर में लिगेट हो जाती है, क्लोनिंग प्रक्रिया जारी रखती है, जबकि सबक्लोनिंग में, ब्याज के पहले से क्लोन किए गए जीन को मूल वेक्टर से अलग किया जाता है और फिर से डाला जाता है एक प्राप्तकर्ता वेक्टर और प्रक्रिया जारी रखें।
क्लोनिंग क्या है?
क्लोनिंग वह प्रक्रिया है जो आनुवंशिक रूप से समान जीवों या कोशिकाओं का निर्माण करती है। प्रकृति में, क्लोनिंग अलैंगिक प्रजनन के माध्यम से होती है। जब कोई आनुवंशिक पुनर्संयोजन या परिवर्तन नहीं होता है, तो बेटी कोशिकाओं को माता-पिता के समान आनुवंशिक मेकअप प्राप्त होता है। प्रोकैरियोटिक और यूकेरियोटिक जीव बाइनरी विखंडन, बडिंग, माइटोसिस आदि द्वारा क्लोन बनाते हैं। आणविक जीव विज्ञान में, क्लोनिंग जीन या डीएनए के विशिष्ट टुकड़े उस विशेष डीएनए अनुभाग की संरचना और कार्य का अध्ययन करने के लिए एक लोकप्रिय तरीका है।
आणविक क्लोनिंग का मुख्य उद्देश्य आनुवंशिक रूप से समान कोशिकाओं या जीवों के डीएनए अंश (मुख्य रूप से जीन) को प्रभावित करने वाली लाखों प्रतियां बनाना है।यह दूसरे की सटीक आनुवंशिक प्रतियों के साथ जीवों का निर्माण करता है। मुख्य रूप से, संरचनात्मक और कार्यात्मक जानकारी प्राप्त करने और डीएनए अनुक्रमण के लिए आणविक अध्ययनों में विशिष्ट जीनों का क्लोन बनाया जाता है। साथ ही, बड़े पैमाने पर विशिष्ट प्रोटीन या उत्पादों के उत्पादन के लिए, क्लोनिंग का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
क्लोनिंग प्रक्रिया
क्लोनिंग प्रक्रिया के मूल चरण इस प्रकार हैं।
- रुचि के जीन की पहचान और अलगाव। (पीसीआर द्वारा रुचि के जीन का प्रवर्धन)।
- रुचि के जीन के पाचन पर प्रतिबंध (प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज़ ने जीन को काट दिया)।
- वेक्टर डीएनए के पाचन पर प्रतिबंध। (वेक्टर डीएनए भी उसी प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइज का उपयोग करके काटा जाता है)।
- सदिश में जीन का सम्मिलन और पुनः संयोजक अणु का निर्माण।
- पुनः संयोजक वेक्टर का एक मेजबान जीवाणु में परिवर्तन।
- रूपांतरित बैक्टीरिया का अलगाव और पहचान (प्लाज्मिड वेक्टर में एक चयन योग्य जीन होना चाहिए, जो आमतौर पर रूपांतरित बैक्टीरिया को स्क्रीन करने के लिए एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीन होता है)।
- पोषक के भीतर पुनः संयोजक जीन अभिव्यक्ति।
चित्रा_01: क्लोनिंग प्रक्रिया
सबक्लोनिंग क्या है?
सबक्लोनिंग जीन की वांछित कार्यक्षमता प्राप्त करने के लिए जीन की अभिव्यक्ति को देखने के लिए एक वेक्टर से दूसरे वेक्टर में रुचि के जीन को स्थानांतरित करने की एक प्रक्रिया है। इस पद्धति में, दो वैक्टर शामिल हैं; अर्थात्, मूल वेक्टर और गंतव्य वेक्टर। सबक्लोनिंग में क्लोन किए गए इंसर्ट को फिर से दूसरे वेक्टर में ले जाया जाता है। जीन को पहले वेक्टर से दूसरे वेक्टर में स्थानांतरित करने का उद्देश्य कुछ ऐसा प्राप्त करना है जो पहले वेक्टर द्वारा नहीं किया जा सकता है या डीएनए के पहले से क्लोन किए गए टुकड़े के भीतर एक जीन को फिर से अलग करना और इसे अकेले व्यक्त करना है। इस प्रक्रिया में शुरुआत में प्रतिबंध एंजाइम का उपयोग किया जाता है।
सबक्लोनिंग प्रक्रिया
सबक्लोनिंग के मूल चरण इस प्रकार हैं।
- प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस की मदद से, डोनर प्लास्मिड (पैरेंट वेक्टर) में रुचि के डीएनए को अलग करना।
- पीसीआर का उपयोग करके रुचि के डीएनए का प्रवर्धन।
- जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा पीसीआर उत्पाद (ब्याज का डीएनए) की शुद्धि।
- पेरेंट प्लास्मिड में रुचि के डीएनए को अलग करने के लिए उपयोग किए जाने वाले समान प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिअस द्वारा प्राप्तकर्ता प्लास्मिड को खोलना।
- उपक्लोन प्लास्मिड बनाने के लिए प्राप्तकर्ता प्लास्मिड में रुचि के डीएनए (जीन) का बंधन।
- उप-क्लोन किए गए वेक्टर का एक सक्षम मेजबान जीवाणु में परिवर्तन।
- रूपांतरित कोशिकाओं की स्क्रीनिंग।
- प्लाज्मिड डीएनए की शुद्धि और वांछित उत्पादों को प्राप्त करने के लिए डीएनए अनुक्रमण या जीन की अभिव्यक्ति के लिए उपयोग।
सबक्लोनिंग जीन के क्लोन समूह से एक जीन को अलग करने के अवसरों पर किया जाता है या जब ब्याज के जीन के सटीक कार्य को देखने के लिए एक उपयोगी प्लास्मिड में स्थानांतरित करने के लिए ब्याज की जीन की आवश्यकता होती है।
चित्र_02: सबक्लोनिंग प्रक्रिया
क्लोनिंग और सबक्लोनिंग में क्या अंतर है?
क्लोनिंग बनाम सबक्लोनिंग |
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| क्लोनिंग वह प्रक्रिया है जो आनुवंशिक रूप से समान जीवों या कोशिकाओं का निर्माण करती है। | सबक्लोनिंग जीन की वांछित कार्यक्षमता प्राप्त करने के लिए जीन की अभिव्यक्ति को देखने के लिए एक वेक्टर से दूसरे वेक्टर में रुचि के जीन को स्थानांतरित करने की एक प्रक्रिया है। |
| प्रक्रिया | |
| जीव से रुचि के डीएनए को अलग करें और एक बार वेक्टर में डालें और क्लोन करें | पहले से ही क्लोन किए गए डीएनए को पहले वेक्टर से अलग किया जाता है और दूसरे वेक्टर में डाला जाता है और क्लोन किया जाता है। |
| वेक्टर के माध्यम से आंदोलन डालें | |
| एक वेक्टर से दूसरे वेक्टर में इंसर्ट (दिलचस्पी का डीएनए) को स्थानांतरित नहीं करता है। | अभिविन्यास को पैरेंट वेक्टर से गंतव्य वेक्टर में ले जाएं। |
सारांश – क्लोनिंग बनाम सबक्लोनिंग
क्लोनिंग आनुवंशिक रूप से समान कोशिकाओं या जीवों को सम्मिलित जीन या रुचि के डीएनए के साथ बनाता है। यह एक मेजबान जीवाणु के भीतर एक वेक्टर और अभिव्यक्ति में रुचि के डीएनए के पृथक्करण और सम्मिलन के माध्यम से आगे बढ़ता है। सबक्लोनिंग क्लोनिंग के समान चरणों को साझा करता है। हालांकि, सबक्लोनिंग में, पहले से ही क्लोन डीएनए टुकड़ा (रुचि का जीन) एक वेक्टर में डाला जाता है और एक मेजबान जीवाणु में बदल जाता है। क्लोनिंग और सबक्लोनिंग में यही मुख्य अंतर है।
