Coomassie और सिल्वर स्टेनिंग के बीच मुख्य अंतर यह है कि Coomassie स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जो Coomassie शानदार ब्लू स्टेन का उपयोग करती है, जबकि स्लीवर स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जो सिल्वर स्टेन का उपयोग करती है।
प्रोटीन पृथक्करण और पहचान प्रोटिओम विश्लेषण में महत्वपूर्ण कदम हैं। जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद उन्हें उच्च-रिज़ॉल्यूशन प्रोटीन लक्षण वर्णन की आवश्यकता होती है। कई धुंधला तकनीकें हैं जिनमें विभिन्न दाग शामिल हैं जैसे कि आयनिक डाई (कोमासी ब्रिलियंट ब्लू), मेटल केशन (इमिडाजोल-जिंक), सिल्वर स्टेन और फ्लोरोसेंट डाई आदि। कभी-कभी, रेडियोधर्मी जांच का भी उपयोग किया जा सकता है।स्टेनिंग तकनीक का चुनाव सरलता, प्रयोगशाला में इमेजिंग उपकरणों की उपलब्धता आदि पर निर्भर करता है।
Coomassie स्टेनिंग क्या है?
Coomassie स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जो Coomassie शानदार नीले दाग का उपयोग करती है। इसे आमतौर पर कोमास्सी ब्लू तकनीक कहा जाता है। Coomassie ब्रिलियंट ब्लू सबसे लोकप्रिय anionic प्रोटीन-डाई है। यह दाग आम तौर पर मध्यम संवेदनशीलता पर अच्छी मात्रात्मक रैखिकता वाले लगभग सभी प्रोटीनों को दाग देता है। Coomassie शानदार नीला दाग गैर-विशेष रूप से लगभग सभी प्रोटीनों को बांधता है। दो अलग-अलग Coomassie ब्रिलियंट ब्लू स्टेन वेरिएंट हैं: R-250 और G-250। R-250 कम धुंधला समय प्रदान करता है, जबकि G-250 अधिक संवेदनशील और पर्यावरण के अनुकूल योगों में उपलब्ध है।
चित्रा 01: Coomassie धुंधला
Coomassie रंजक मास स्पेक्ट्रोमेट्री अध्ययन और प्रोटीन पहचान अध्ययनों में बहुत लोकप्रिय हैं। इसके अलावा, जैव-सुरक्षित Coomassie स्टेन Coomassie Blue G-250 का एक गैर-खतरनाक सूत्रीकरण है जो वर्तमान में बाजार में उपलब्ध है। इस फॉर्मूलेशन का लाभ यह है कि इसे धोने और नष्ट करने के लिए केवल पानी की आवश्यकता होती है। जैव-सुरक्षित Coomassie दाग पारंपरिक Coomassie नीले G-250 के बराबर संवेदनशीलता प्रदान करता है लेकिन Coomassie दाग R-250 से बेहतर है। इसके अलावा, इसमें पारंपरिक Coomassie ब्लू G-250 की तुलना में एक सरल और तेज धुंधला प्रोटोकॉल है। Coomassie ब्लू स्टेनिंग का दोष यह है कि यह सिल्वर स्टेनिंग की तुलना में कम संवेदनशील होता है। Coomassie ब्लू स्टेनिंग सिल्वर स्टेनिंग की तुलना में लगभग 50 गुना कम संवेदनशील होता है। हालांकि, बंधन में सरलता के कारण, इसे कई अध्ययनों में पसंद किया जाता है।
सिल्वर स्टेनिंग क्या है?
सिल्वर स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जिसमें सिल्वर स्टेन का उपयोग किया जाता है।सिल्वर स्टेनिंग का उपयोग agarose और polyacrylamide जैल दोनों को दागने के लिए किया जाता है। agarose जैल में प्रोटीन का सिल्वर स्टेनिंग पहली बार 1973 में Kerenyi और Gallyas द्वारा विकसित किया गया था। बाद में, इसे एसडीएस-पेज में उपयोग किए जाने वाले पॉलीएक्रिलामाइड जैल में प्रोटीन के लिए अनुकूलित किया गया था। वर्तमान में, डीएनए या आरएनए को धुंधला करने के लिए सिल्वर स्टेनिंग का भी उपयोग किया जाता है। जैल को दागने के लिए, इस विधि में जैल को सिल्वर नाइट्रेट के घोल से इनक्यूबेट किया जाता है। सिल्वर स्टेनिंग उन जगहों को दाग देता है जहां प्रोटीन भूरे से काले रंग में मौजूद होते हैं।
चित्र 02: सिल्वर स्टेनिंग
चांदी के धुंधलापन की तीव्रता प्रोटीन की प्राथमिक संरचना पर निर्भर करती है। इसके अलावा, इस्तेमाल किए गए जहाजों की सफाई और अभिकर्मकों की शुद्धता भी चांदी के दाग की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकती है।हालांकि, सिल्वर स्टेनिंग का दोष यह है कि यह सभी प्रोटीन, विशेष रूप से ग्लाइकोप्रोटीन और प्रोटीन का पता लगाने में असमर्थ है, जिसमें बड़े संशोधित समूह उनकी साइड चेन से जुड़े होते हैं।
कूमासी और सिल्वर स्टेनिंग में क्या समानताएं हैं?
- Coomassie और सिल्वर स्टेनिंग प्रोटीन स्टेनिंग में इस्तेमाल की जाने वाली दो तकनीकें हैं।
- वे प्रोटीन और डीएनए दोनों को दाग सकते हैं।
- दोनों धुंधला तकनीकों में कमियां हैं।
- इन तकनीकों में समान चरण होते हैं, जैसे फिक्सिंग, स्टेनिंग और डेस्टिनेशन।
कूमासी और सिल्वर स्टेनिंग में क्या अंतर है?
Coomassie स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जिसमें Coomassie ब्रिलियंट ब्लू स्टेन का उपयोग किया जाता है, जबकि स्लीवर स्टेनिंग एक प्रोटीन स्टेनिंग तकनीक है जो सिल्वर स्टेन का उपयोग करती है। इस प्रकार, यह Coomassie और सिल्वर स्टेनिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, Coomassie धुंधला चांदी के धुंधला होने की तुलना में कम संवेदनशील है।
नीचे दिए गए इन्फोग्राफिक में कोमास्सी और सिल्वर स्टेनिंग के बीच अंतर को सारणीबद्ध रूप में साथ-साथ तुलना के लिए सूचीबद्ध किया गया है।
सारांश – Coomassie बनाम सिल्वर स्टेनिंग
प्रोटीन की कल्पना करने के लिए, प्रोटीन-विशिष्ट डाई-बाइंडिंग या रंग पैदा करने वाली रासायनिक प्रतिक्रिया की जा सकती है। इसे प्रोटीन धुंधला कहा जाता है। Coomassie और सिल्वर स्टेनिंग दो तकनीकें हैं जिनका उपयोग प्रोटीन स्टेनिंग में किया जाता है। Coomassie स्टेनिंग तकनीक Coomassie ब्रिलियंट ब्लू स्टेन का उपयोग करती है जबकि स्लीवर स्टेनिंग सिल्वर स्टेन का उपयोग करती है। तो, यह Coomassie और सिल्वर स्टेनिंग के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
