जीएफपी और ईजीएफपी के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि जीएफपी गैर-स्तनधारी कोशिकाओं के आणविक क्लोनिंग में शामिल एक जंगली प्रकार का प्रोटीन है, जबकि ईजीएफपी एक बेहतर या इंजीनियर प्रकार का जीएफपी है जिसका उपयोग स्तनधारी कोशिकाओं पर किया जा सकता है।.
आणविक क्लोनिंग एक उन्नत तकनीक है जिसे वैज्ञानिक पुनः संयोजक तकनीक के माध्यम से प्रोटीन को व्यक्त करने में अत्यधिक उपयोग करते हैं। पुनर्योगज डीएनए प्रौद्योगिकी में पुनर्योगज सदिश को परपोषी जीव में सफलतापूर्वक रूपांतरित करना आवश्यक है। इसलिए, परिवर्तन प्रक्रिया के दौरान, इसकी पहचान की जानी चाहिए और पुष्टि की जानी चाहिए कि रुचि के जीन को मेजबान में बदल दिया गया है या नहीं। इसका आकलन करने के लिए, आणविक जीवविज्ञानी कई तकनीकों को अपनाते हैं।उन तकनीकों में से एक है रिपोर्टर जीन। ये रिपोर्टर जीन सही ट्रांसफॉर्मेंट्स का चयन करने के लिए चयन योग्य मार्कर के रूप में कार्य करते हैं। इस प्रकार, ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) और एन्हांस्ड ग्रीन फ्लोरेसेंट प्रोटीन (ईजीएफपी) आणविक क्लोनिंग में उपयोग किए जाने वाले दो रिपोर्टर प्रोटीन हैं।
जीएफपी क्या है?
GFP एक जंगली प्रकार का प्रोटीन है जिसमें 238 अमीनो एसिड अवशेष और अमीनो एसिड अनुक्रम के कई चयन योग्य क्षेत्र होते हैं जो इसे अन्य फ्लोरोसेंट प्रोटीन से अलग करते हैं। इसके अलावा, यह जंगली प्रकार का प्रोटीन मूल रूप से एक्वोरिया विक्टोरिया से अलगाव में था; एक प्रकार की जेलीफ़िश। हालांकि, प्राकृतिक घटनाओं में, जेलिफ़िश कुछ उत्तेजनाओं के जवाब में हरे रंग की प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने में सक्षम थी।
इससे पहले, इस अवधारणा ने वैज्ञानिकों को आश्चर्यचकित किया, और उन्होंने इसे अपनी पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकियों पर उपयोग करने का निर्णय लिया। नतीजतन, वैज्ञानिकों ने अपने जीन अभिव्यक्ति अध्ययनों में एक रिपोर्टर जीन के रूप में जंगली प्रकार के जीन के इस उत्परिवर्ती रूप का इस्तेमाल किया। जीएफपी का जंगली प्रकार का जीन एक प्रोटीन का उत्पादन करने में सक्षम है जो कमरे के तापमान पर या यूवी प्रकाश के तहत फ्लोरोसेंस देता है।इसलिए, जब ट्रांसफॉर्मेंट्स में डाला जाता है, तो यह फ्लोरोसेंस व्यक्त करता है और उत्पन्न करता है। यदि परिवर्तन प्रक्रिया के बाद प्रतिदीप्ति परिणाम होता है, तो यह परिवर्तन प्रक्रिया की सफलता की पुष्टि करता है। सरल शब्दों में, फ्लोरोसेंस उत्सर्जन उस वेक्टर के सफल परिवर्तन का संकेत देता है जो रुचि के जीन को मेजबान में ले जाता है।
चित्र 01: जीएफपी
इस कारण से, जीएफपी जीन अभिव्यक्ति के इन विवो मार्कर के रूप में कार्य करता है। वर्तमान में, जीएफपी के उत्पादन के लिए जेनेटिक इंजीनियरिंग तकनीकों का उपयोग किया जा रहा है। इसके अलावा, जीएफपी के कई उन्नत संस्करण जैसे ईजीएफपी उपलब्ध हैं। इसलिए, यह आणविक क्लोनिंग और जीन अभिव्यक्ति अध्ययनों में जीएफपी के कुशल उपयोग को सक्षम बनाता है।
ईजीएफपी क्या है?
एन्हांस्ड ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन या ईजीएफपी जीएफपी का एक उन्नत संस्करण है।सरल शब्दों में, हम ईजीएफपी को जंगली प्रकार के जीएफपी के इंजीनियर संस्करण के रूप में परिभाषित कर सकते हैं। जब GFP के जंगली प्रकार के जीन उत्परिवर्तित होते हैं, तो यह लाभकारी प्रभाव पैदा करता है। इसलिए, जीएफपी का उत्परिवर्तित जीन नए पात्रों की अभिव्यक्ति की अनुमति देता है, और इसके परिणामस्वरूप, हम बेहतर विशेषताओं के साथ उन्नत जीएफपी का उत्पादन कर सकते हैं। इसके अलावा, हम विकिरण या रासायनिक विधियों का उपयोग करके जंगली प्रकार के GFP जीन में सफलतापूर्वक उत्परिवर्तन पेश कर सकते हैं। ये उत्परिवर्तित जीन तब ईजीएफपी का उत्पादन करते हैं, जिसमें अधिक लाभकारी विशेषताएं होती हैं।
चित्र 02: ईजीएफपी
ईजीएफपी की बेहतर विशेषताएं इस प्रकार हैं;
- मजबूत प्रतिदीप्ति संकेतों का उत्सर्जन करने में सक्षम।
- उच्च संवेदनशीलता है।
- प्रोकैरियोट्स और अन्य निचले स्तर के यूकेरियोट्स के बजाय स्तनधारी कोशिकाओं पर इसका इस्तेमाल कर सकते हैं।
- उत्पाद की बढ़ी हुई शुद्धता भी प्रदान करता है।
इसलिए, जीएफपी की तुलना में, ईजीएफपी जीन अभिव्यक्ति अध्ययन के लिए पसंदीदा विकल्प है। हालांकि, जीएफपी की तुलना में उत्पाद अधिक महंगा है।
जीएफपी और ईजीएफपी के बीच समानताएं क्या हैं?
- जीएफपी और ईजीएफपी दो प्रोटीन हैं जो हरे रंग का उत्सर्जन करने की क्षमता रखते हैं
- इसलिए, दोनों जीन अभिव्यक्ति अध्ययन में रिपोर्टर प्रोटीन के रूप में कार्य करते हैं।
- साथ ही, पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी का उपयोग करके दोनों को संश्लेषित करना संभव है।
- इसके अलावा, बेहतर रूपों को संश्लेषित करने के लिए इन दो प्रकारों को और अधिक बदलना आसान है।
जीएफपी और ईजीएफपी में क्या अंतर है?
रिपोर्टर जीन एक ऐसा जीन है जो पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी में रुचि रखने वाले जीन के साथ जुड़ता है। यह मेजबान को पुनः संयोजक वेक्टर के सफल परिवर्तन का संकेत देता है।यहां, जीएफपी और ईजीएफपी दो प्रकार के हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन हैं जो रिपोर्टर प्रोटीन के रूप में काम करते हैं। हालाँकि, GFP और EGFP के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि GFP एक जंगली प्रकार है जबकि EGFP GFP का एक इंजीनियर संस्करण है। इसके अलावा, ईजीएफपी में जीएफपी की तुलना में अधिक लाभकारी विशेषताएं हैं। उदाहरण के लिए, ईजीएफपी मजबूत फ्लोरोसेंट रोशनी पैदा करता है और जीएफपी की तुलना में अधिक संवेदनशील होता है। जीएफपी और ईजीएफपी के बीच एक और अंतर वह सिस्टम है जिसमें हम इनका उपयोग कर सकते हैं। गैर-स्तनधारी प्रणालियाँ GFP का उपयोग करती हैं जबकि स्तनधारी प्रणालियाँ EGFP का उपयोग करती हैं।
नीचे दिया गया इन्फोग्राफिक जीएफपी और ईजीएफपी के बीच अंतर को सारणीबद्ध रूप में प्रस्तुत करता है।
सारांश - जीएफपी बनाम ईजीएफपी
जीएफपी और ईजीएफपी आणविक क्लोनिंग और जीन अभिव्यक्ति अध्ययन में रिपोर्टर प्रोटीन हैं। जीएफपी जंगली प्रकार का प्रोटीन है, जो एक हरे रंग का फ्लोरोसेंट प्रोटीन है।प्रोटीन शुरू में जेलिफ़िश एक्वोरिया विक्टोरिया से अलगाव में था। इसके विपरीत, ईएफजीपी जीएफपी प्रोटीन का एक उन्नत रूप है। यह बेहतर विशेषताओं के साथ जंगली-प्रकार का उत्परिवर्ती है। इसलिए, ईएफजीपी में उच्च सिग्नल शक्ति और उच्च संवेदनशीलता है। इसलिए, हम इसका उपयोग स्तनधारी वैक्टर पर कर सकते हैं। इसके विपरीत, GFP का उपयोग मुख्य रूप से केवल गैर-स्तनधारी वैक्टर पर होता है। कुल मिलाकर, यह GFP और EGFP के बीच का अंतर है।
