मुख्य अंतर - पेपर बनाम पतली परत बनाम कॉलम क्रोमैटोग्राफी
पेपर क्रोमैटोग्राफी, पतली परत क्रोमैटोग्राफी, और कॉलम क्रोमैटोग्राफी तीन प्रकार की क्रोमैटोग्राफिक तकनीकें हैं। पेपर क्रोमैटोग्राफी, पतली परत क्रोमैटोग्राफी और कॉलम क्रोमैटोग्राफी के बीच महत्वपूर्ण अंतर क्रोमैटोग्राफी तकनीक में प्रयुक्त स्थिर चरण के प्रकार पर आधारित है। पेपर क्रोमैटोग्राफी अपने स्थिर चरण के रूप में सेल्यूलोज पेपर का उपयोग करती है, पतली परत क्रोमैटोग्राफी अपने स्थिर चरण के रूप में एल्यूमिना या सिलिका जेल का उपयोग करती है, जबकि कॉलम क्रोमैटोग्राफी अपने स्थिर चरण के रूप में उपयुक्त मैट्रिक्स सामग्री के साथ पैक किए गए कॉलम का उपयोग करती है।
प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट जैसे जैव-अणुओं के पृथक्करण और पहचान की प्रक्रिया में, क्रोमैटोग्राफी एक महत्वपूर्ण जैव-भौतिकीय तकनीक का उपयोग किया जाता है। क्रोमैटोग्राफी यौगिकों को उनकी घुलनशीलता, आकार और आवेश के आधार पर अलग करती है। पृथक्करण तंत्र के आधार पर, क्रोमैटोग्राफी आयन एक्सचेंज, अवशोषण, विभाजन और आकार बहिष्करण जैसे तंत्र का उपयोग करती है और तीन क्रोमैटोग्राफिक तकनीकें हैं; अर्थात्, कागज, पतली परत, और स्तंभ क्रोमैटोग्राफी। पेपर क्रोमैटोग्राफी यौगिक के ठोस-तरल सोखना और घुलनशीलता पर आधारित है, और यह स्थिर चरण के रूप में सेल्यूलोज पेपर का उपयोग करता है। पतली परत क्रोमैटोग्राफी अणुओं के ठोस-तरल सोखना पर आधारित है। इसका एक स्थिर चरण होता है जो आम तौर पर एल्यूमिना या सिलिका जेल से बना होता है और मोबाइल चरण जो विलायक होता है। कॉलम क्रोमैटोग्राफी एक मैट्रिक्स के साथ पैक किए गए कॉलम का उपयोग करता है जिसका उपयोग मुख्य रूप से उनके आकार, आत्मीयता या उसके चार्ज के आधार पर अणुओं को अलग करने के लिए किया जाता है।
पेपर क्रोमैटोग्राफी क्या है?
पेपर क्रोमैटोग्राफी सबसे सरल प्रकार की क्रोमैटोग्राफी है, और इसका उपयोग व्यापक शोध के लिए नहीं किया जाता है। यह मुख्य रूप से छात्र प्रयोगशालाओं में मिश्रण में मौजूद अमीनो एसिड और कार्बोहाइड्रेट जैसे जैव-अणुओं की पहचान करने के लिए उपयोग किया जाता है। पेपर क्रोमैटोग्राफी एक स्थिर चरण का उपयोग करता है जिसे सेल्युलोज पेपर या व्हाटमैन फिल्टर पेपर और एक मोबाइल चरण का उपयोग करके बनाया जाता है जिसे आमतौर पर कार्बनिक सॉल्वैंट्स जैसे एन-ब्यूटेनॉल, आदि का उपयोग करके तैयार किया जाता है। स्थिर चरण पानी से संतृप्त होता है, जिससे स्थिर चरण तरल होता है। इस प्रकार, जब यौगिकों को देखा जाता है और मोबाइल चरण की उपस्थिति में चलने की अनुमति दी जाती है, तो यौगिकों की घुलनशीलता के आधार पर, वे अलग हो जाते हैं। इस प्रकार, क्रोमैटोग्राम के विकास पर, प्रत्येक यौगिक की लंबाई निर्धारित करने के लिए धुंधलापन किया जा सकता है। इस प्रकार अवधारण कारक की गणना की जा सकती है।
चित्र 01: पेपर क्रोमैटोग्राफी
पेपर क्रोमैटोग्राफी को आगे चल रहे सॉल्वेंट की दिशा के आधार पर आरोही पेपर क्रोमैटोग्राफी और अवरोही पेपर क्रोमैटोग्राफी के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है।
पतली परत क्रोमैटोग्राफी क्या है?
पतली परत क्रोमैटोग्राफी या टीएलसी एक मिश्रण में मौजूद विभिन्न अमीनो एसिड की पहचान करने या प्रोटीन की पहचान के लिए आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली तकनीक है। पृथक्करण की तकनीक ठोस-तरल सोखना पर आधारित है। पतली परत क्रोमैटोग्राफी के दौरान, स्थिर चरण के रूप में एल्यूमिना या सिलिका जेल से बनी प्लेट का उपयोग किया जाता है। विलायक मिश्रण आवश्यकता पर भिन्न होता है और विलायक तैयार करने के लिए कार्बनिक यौगिकों जैसे एन-ब्यूटेनॉल, एसिटिक एसिड और पानी के विभिन्न संयोजनों का उपयोग कर सकता है। अलग किए जाने वाले यौगिकों को प्लेट पर देखा जाता है और विलायक मिश्रण में डुबोया जाता है। एक बार जब विलायक प्लेट द्वारा दी गई केशिका क्रिया के आधार पर ऊपर चला जाता है, तो प्लेट पर धब्बेदार यौगिक भी विलायक में उनकी घुलनशीलता के आधार पर गति करते हैं।
चित्र 02: पतली परत क्रोमैटोग्राफी
क्रोमैटोग्राम चलाने के बाद धब्बों का पता लगाने के लिए अलग-अलग स्टेनिंग प्रक्रियाएं की जाती हैं। कुछ लोग निनहाइड्रिन स्टेनिंग का उपयोग करते हैं जो कि धुंधला करने का एक विषैला तरीका है। आधुनिक पतली परत क्रोमैटोग्राम रन के बाद क्रोमैटोग्राम को देखने के लिए फ्लोरेसेंस तकनीकों का उपयोग करते हैं। उसके द्वारा तय की गई दूरी के आधार पर, प्रत्येक यौगिक के अवधारण समय की गणना की जा सकती है। इसका उपयोग उपयोग किए गए मिश्रण के आधार पर अलग किए गए यौगिक के प्रकार की पहचान करने के लिए किया जा सकता है। टीएलसी का उपयोग मुख्य रूप से प्रोटीन मिश्रण में अमीनो एसिड की पहचान करने और मिश्रण में मौजूद विभिन्न प्रकार के मोनोसेकेराइड को अलग करने के लिए किया जाता है।
कॉलम क्रोमैटोग्राफी क्या है?
कॉलम क्रोमैटोग्राफी एक व्यापक शब्द है जिसका उपयोग कई प्रकार की क्रोमैटोग्राफी तकनीकों का वर्णन करने के लिए किया जाता है जो कॉलम आधारित पृथक्करण विधि का उपयोग करते हैं।कॉलम क्रोमैटोग्राफी में, यौगिकों को अलग करने के लिए पैकिंग सामग्री के साथ एक भौतिक कॉलम का उपयोग किया जाता है। पृथक्करण यौगिकों द्वारा प्रदर्शित विभिन्न भौतिक गुणों पर आधारित हो सकता है। ये गुण चार्ज, आकार, 3डी संरचना और बाध्यकारी क्षमता आदि हो सकते हैं। इस प्रकार, मैट्रिक्स सामग्री के साथ पैक किया गया कॉलम स्थिर चरण के रूप में कार्य करता है और कॉलम पर लागू वॉश बफर मोबाइल चरण के रूप में कार्य करता है।
यदि अणुओं को आकार के आधार पर अलग किया जाता है, तो पैकिंग सामग्री को इस तरह से पैक किया जाता है कि यह यौगिकों के माध्यम से यात्रा करने के लिए छिद्र छोड़ देता है। इस प्रकार, बड़े अणु जो छिद्रों से प्रवाहित नहीं हो सकते हैं, उन्हें पहले हटा दिया जाता है, जबकि छोटे अणुओं को समाप्त होने में अधिक समय लगता है।
चित्र 03: कॉलम क्रोमैटोग्राफी
यदि अणुओं को उनके आवेश के आधार पर अलग किया जाता है, तो स्थिर चरण में या तो एक आयन या कटियन एक्सचेंजर होगा, जिससे यौगिक अपने आवेश के आधार पर आकर्षित होंगे। इस प्रकार धुलाई चरण के दौरान, गैर-बाध्य यौगिकों को क्षालन किया जाएगा। रेफरेंस बफर को जोड़ने पर, बाउंड चार्ज किए गए यौगिकों को हटा दिया जाएगा। इन एलुएंट्स का पता लगाना ज्यादातर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक तकनीकों पर आधारित है।
कागज की पतली परत और कॉलम क्रोमैटोग्राफी के बीच समानताएं क्या हैं?
- ऑल पेपर थिन लेयर और कॉलम क्रोमैटोग्राफी तीन तकनीकों का उपयोग बायोमोलेक्यूलस जैसे अमीनो एसिड, प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट को अलग करने के लिए किया जाता है।
- पेपर थिन लेयर और कॉलम क्रोमैटोग्राफी तकनीकों में एक मोबाइल चरण और एक स्थिर चरण होता है।
- पेपर थिन लेयर और कॉलम क्रोमैटोग्राफी तकनीक पृथक्करण के लिए बायोफिजिकल मैकेनिज्म का उपयोग करती है।
पेपर थिन लेयर और कॉलम क्रोमैटोग्राफी में क्या अंतर है?
पेपर बनाम पतली परत बनाम कॉलम क्रोमैटोग्राफी |
|
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | पेपर क्रोमैटोग्राफी एक क्रोमैटोग्राफिक तकनीक है जिसका उपयोग यौगिक के तरल-तरल सोखना और घुलनशीलता के आधार पर यौगिकों को अलग करने के लिए किया जाता है। यह अपने स्थिर चरण के रूप में सेल्यूलोज पेपर का उपयोग करता है। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | पतली परत क्रोमैटोग्राफी अणुओं के ठोस-तरल सोखना पर आधारित एक अन्य क्रोमैटोग्राफिक तकनीक है। इसमें एल्यूमिना या सिलिका जेल से बना एक स्थिर चरण है और मोबाइल चरण के रूप में एक विलायक है, जो विलायक है। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | स्तंभ क्रोमैटोग्राफी एक मैट्रिक्स के साथ पैक किए गए कॉलम का उपयोग करता है जिसका उपयोग मुख्य रूप से उनके आकार, आत्मीयता या उसके चार्ज के आधार पर अणुओं को अलग करने के लिए किया जाता है। |
| स्थिर चरण | |
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | व्हाटमैन के नाइट्रोसेल्यूलोज से बने कागज का उपयोग पेपर क्रोमैटोग्राफी में स्थिर चरण के रूप में किया जाता है। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | एल्यूमिना या सिलिका जेल पतली परत क्रोमैटोग्राफी के स्थिर चरण के रूप में प्रयोग किया जाता है। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | उपयुक्त पैकिंग सामग्री से भरे एक कॉलम का उपयोग कॉलम क्रोमैटोग्राफी में स्थिर चरण के रूप में किया जाता है। |
| मोबाइल चरण | |
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | रनिंग सॉल्वेंट पेपर क्रोमैटोग्राफी का मोबाइल चरण है। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | चलने वाला विलायक पतली परत क्रोमैटोग्राफी का मोबाइल चरण है। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | वॉश बफर कॉलम क्रोमैटोग्राफी का मोबाइल चरण है। |
| अलग करने के लिए प्रयुक्त तंत्र | |
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | पेपर क्रोमैटोग्राफी ठोस-तरल अवशोषण पर आधारित है। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | पतली परत क्रोमैटोग्राफी ठोस-तरल अवशोषण पर आधारित है। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | स्तंभ क्रोमैटोग्राफी आकार बहिष्करण, आवेश और आकार पर आधारित है। |
| एल्यूशन बफर | |
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | कागज क्रोमैटोग्राफी द्वारा आवश्यक नहीं। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | पतली परत क्रोमैटोग्राफी के लिए आवश्यक नहीं। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | स्तंभ क्रोमैटोग्राफी में आवश्यक। |
| पता लगाना | |
| पेपर क्रोमैटोग्राफी | धुंधला होना और अवधारण कारक का निर्धारण करके। |
| पतली परत क्रोमैटोग्राफी | धुंधला होना और अवधारण कारक का निर्धारण करके। |
| स्तंभ क्रोमैटोग्राफी | स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक निर्धारण। |
सारांश – पेपर पतली परत बनाम कॉलम क्रोमैटोग्राफी
पेपर क्रोमैटोग्राफी, टीएलसी और कॉलम क्रोमैटोग्राफी, प्रोटीन, अमीनो एसिड और कार्बोहाइड्रेट (मुख्य रूप से मोनोसेकेराइड) जैसे बायोमोलेक्यूल्स को अलग करने के लिए इस्तेमाल की जाने वाली पृथक्करण तकनीक है।पेपर क्रोमैटोग्राफी स्थिर चरण के रूप में सेल्यूलोज पेपर का उपयोग करता है, और पृथक्करण का तंत्र ठोस-तरल सोखना पर आधारित होता है। टीएलसी ठोस-तरल सोखना तंत्र का भी उपयोग करता है। मोबाइल चरण में उनकी घुलनशीलता के आधार पर अणुओं को स्थिर चरण पर अलग किया जाता है। कॉलम क्रोमैटोग्राफी भौतिक गुणों जैसे आकार, आकार, आवेश और यौगिक के आणविक भार को अलग करने के लिए उपयोग करता है। मैट्रिक्स सामग्री के साथ पैक किया गया कॉलम स्थिर चरण के रूप में कार्य करता है, जबकि वॉश बफर विलायक चरण के रूप में कार्य करता है। कागज की पतली परत और कॉलम क्रोमैटोग्राफी में यही अंतर है।
