मुख्य अंतर - फॉरवर्ड बनाम रिवर्स प्राइमर
पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) एक डीएनए एम्प्लीफिकेशन विधि है जिसका उपयोग आणविक जैविक अनुप्रयोगों में किया जाता है। यह आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली तकनीक है जो विशेष रूप से रुचि रखने वाले डीएनए अनुक्रम की लाखों से अरबों प्रतियां बनाती है। यह प्रयोगशालाओं में की जाने वाली इन विट्रो विधि है। पीसीआर तकनीक पूरी तरह से व्यावसायिक रूप से उत्पादित डीएनए पोलीमरेज़ पर निर्भर है जिसे टैक पोलीमरेज़ कहा जाता है। और इसके लिए कई अन्य घटकों और उचित तापमान रखरखाव की भी आवश्यकता होती है। एक महत्वपूर्ण घटक प्राइमर है। प्राइमर लघु डीएनए अनुक्रम हैं जो विशेष रूप से लक्ष्य डीएनए अनुक्रम के लिए डिज़ाइन किए गए हैं।वे आमतौर पर लंबाई में लगभग 20 न्यूक्लियोटाइड होते हैं। टाक पोलीमरेज़ न्यूक्लियोटाइड को पहले से मौजूद न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम में जोड़ने के लिए उत्प्रेरित करता है। इसलिए, प्राइमरों को नए स्ट्रैंड्स के संश्लेषण के शुरुआती बिंदु के रूप में परोसा जाता है। टाक पोलीमरेज़ केवल 5 'से 3' दिशा में काम करता है इसलिए डीएनए संश्लेषण उसी 5 'से 3' दिशा में होता है। चूंकि डीएनए डबल स्ट्रैंडेड है, इसलिए पीसीआर में दो तरह के प्राइमर की जरूरत होती है। उन्हें फॉरवर्ड प्राइमर और रिवर्स प्राइमर के रूप में जाना जाता है। डीएनए संश्लेषण होने पर डीएनए में प्राइमर के बढ़ाव की दिशा के आधार पर फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर को कहा जाता है। फॉरवर्ड प्राइमर एंटीसेंस डीएनए स्ट्रैंड के साथ एनील करता है और जीन के + वी स्ट्रैंड के संश्लेषण को 5 'से 3' दिशा में शुरू करता है। रिवर्स प्राइमर सेंस स्ट्रैंड के साथ एनील्स करता है और कोडिंग स्ट्रैंड के पूरक स्ट्रैंड के संश्लेषण को शुरू करता है; जो है - जीन के स्ट्रैंड को 5'से 3' दिशा में। फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमरों के बीच यह महत्वपूर्ण अंतर है।
फॉरवर्ड प्राइमर क्या है?
फॉरवर्ड ओरिएंटेशन एक जीन के कोडिंग स्ट्रैंड या सेंस स्ट्रैंड का संश्लेषण है। टाक पोलीमरेज़ 5 'से 3' दिशा में एक नए स्ट्रैंड के संश्लेषण को उत्प्रेरित करता है। कोडिंग स्ट्रैंड का संश्लेषण तब होता है जब प्राइमर नॉनकोडिंग या एंटीसेंस स्ट्रैंड के साथ जुड़ जाता है और 5 'से 3' दिशा में बढ़ जाता है।
चित्र 01: फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर
जो प्राइमर एंटीसेंस स्ट्रैंड या नॉनकोडिंग स्ट्रैंड या टेम्प्लेट स्ट्रैंड से एनल करता है, उसे फॉरवर्ड प्राइमर के रूप में जाना जाता है क्योंकि फॉरवर्ड प्राइमर कोडिंग के संश्लेषण या जीन के पॉजिटिव स्ट्रैंड के शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। फॉरवर्ड प्राइमर में एक छोटा न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम होता है जो एंटीसेंस स्ट्रैंड के 3 'फ्लैंकिंग एंड का पूरक होता है। यह एंटीसेंस स्ट्रैंड के साथ संकरण करता है और टैक पोलीमरेज़ को न्यूक्लियोटाइड जोड़ने की सुविधा देता है जो टेम्पलेट स्ट्रैंड के पूरक हैं।
रिवर्स प्राइमर क्या है?
रिवर्स प्राइमर एक छोटा डीएनए अनुक्रम है जो सेंस स्ट्रैंड या कोडिंग स्ट्रैंड के 3' छोर से जुड़ता है। रिवर्स प्राइमर कोडिंग अनुक्रम या गैर-कोडिंग अनुक्रम के पूरक स्ट्रैंड को संश्लेषित करने के लिए प्रारंभिक बिंदु के रूप में कार्य करता है। रिवर्स प्राइमर को कोडिंग स्ट्रैंड के 3' छोर के पूरक के रूप में डिज़ाइन किया गया है। इसलिए, यह कोडिंग स्ट्रैंड के फ्लैंकिंग 3 'अंत के साथ की घोषणा करता है और टैक पोलीमरेज़ को एंटीसेंस स्ट्रैंड या टेम्प्लेट स्ट्रैंड को संश्लेषित करने की अनुमति देता है। चूंकि इसकी ओरिएंटेशन उलटे तरीके से है, इसलिए इस प्राइमर को रिवर्स प्राइमर के रूप में लेबल किया गया है।
दोनों रिवर्स और फॉरवर्ड प्राइमर डीएनए के विशेष क्षेत्रों की लाखों से अरबों प्रतियों के उत्पादन के लिए महत्वपूर्ण हैं जो लक्षित या रुचि रखते हैं।
फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर में क्या समानताएं हैं?
- फॉरवर्ड और रिवर्स दोनों प्राइमर ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स से बने होते हैं।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों में छोटे न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम होते हैं जो डीएनए डबल स्ट्रैंड के फ्लैंकिंग सिरों के पूरक होते हैं।
- आगे और पीछे दोनों प्राइमरों में आमतौर पर 20 न्यूक्लियोटाइड होते हैं।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों का उपयोग पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन में किया जाता है।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों को व्यावसायिक रूप से संश्लेषित किया जाता है।
- फॉरवर्ड और रिवर्स दोनों प्राइमर तापमान स्थिर होते हैं और उनमें सामान्य रूप से समान Tm होता है।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों को टारगेट डीएनए सीक्वेंस के साथ जोड़ा जाता है।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों को पीसीआर प्रतिक्रियाओं के अनुसार डिज़ाइन किया गया है।
- फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर दोनों को डीएनए एम्पलीफिकेशन के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में परोसा जाता है।
- लक्षित या इच्छुक डीएनए अनुक्रमों के विशेष क्षेत्रों की मिलियन प्रतियों के उत्पादन के लिए रिवर्स और फॉरवर्ड प्राइमर दोनों महत्वपूर्ण हैं।
फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर में क्या अंतर है?
फॉरवर्ड प्राइमर बनाम रिवर्स प्राइमर |
|
| फॉरवर्ड प्राइमर एक छोटा डीएनए अनुक्रम है जो गैर-कोडिंग के 3' छोर या जीन के टेम्पलेट स्ट्रैंड के साथ संकरण करता है और कोडिंग अनुक्रम को संश्लेषित करने के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। | रिवर्स प्राइमर छोटा डीएनए अनुक्रम है जो कोडिंग या नॉनटेम्पलेट स्ट्रैंड के 3' छोर के साथ संकरण करता है और नॉनकोडिंग अनुक्रम को संश्लेषित करने के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। |
| एनीलिंग स्ट्रैंड | |
| टेम्पलेट स्ट्रैंड के साथ फॉरवर्ड प्राइमर एनील्स। | नॉनटेम्पलेट स्ट्रैंड के साथ रिवर्स प्राइमर एनील्स। |
| परिणामस्वरूप नया क्रम | |
| फॉरवर्ड प्राइमर कोडिंग अनुक्रम के संश्लेषण की सुविधा प्रदान करता है। | रिवर्स प्राइमर नॉनकोडिंग अनुक्रम के संश्लेषण की सुविधा प्रदान करता है। |
सारांश - फॉरवर्ड बनाम रिवर्स प्राइमर
पीसीआर तकनीक में दो तरह के प्राइमर शामिल होते हैं। वे आगे और पीछे प्राइमर हैं। नए डीएनए स्ट्रैंड संश्लेषण में प्राइमर के बढ़ाव के आधार पर, इन प्राइमरों को लेबल या नाम दिया जाता है। टाक पोलीमरेज़ नए डीएनए को 5 'से 3' ओरिएंटेशन में संश्लेषित करता है। इसलिए, प्राइमर को डबल स्ट्रैंड के 3 'सिरों के पूरक के रूप में डिजाइन किया गया है। फॉरवर्ड प्राइमर जो 5 'से 3' दिशा में बढ़ता है, एंटीसेंस या टेम्पलेट या नॉनकोडिंग अनुक्रम के 3 'अंत के साथ संकरण करता है। यह कोडिंग अनुक्रम को संश्लेषित करने के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। रिवर्स प्राइमर जो 5' से 3' दिशा में लम्बा होता है, कोडिंग के 3' सिरे या नॉनटेम्पलेट या सेंस स्ट्रैंड के साथ संकरण करता है।यह गैर-कोडिंग अनुक्रम को संश्लेषित करने के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर में यही अंतर है।
