मुख्य अंतर - स्टैकिंग जेल बनाम अलग जेल
SDS-PAGE तकनीक को समझाने के लिए स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल शब्दों का उपयोग किया जाता है। एसडीएस-पेज या सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन एक प्रयोगशाला तकनीक है जिसका उपयोग प्रोटीन अणुओं को उनके आणविक भार के आधार पर अलग करने के लिए किया जाता है। तकनीक के पीछे सिद्धांत यह है कि विभिन्न आणविक भार वाले प्रोटीन अलग-अलग प्रवासन दर दिखाते हैं; कम आणविक भार अणु तेजी से पलायन करते हैं जबकि उच्च आणविक भार अणु धीरे-धीरे पलायन करते हैं। प्रवास का माध्यम एक जेल है। जैल दो प्रकार के होते हैं जिन्हें स्टैकिंग जेल और पृथक्कारी जेल नाम दिया गया है।स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि स्टैकिंग जेल का पीएच 6.8 है जबकि अलग करने वाले जेल का पीएच 8.8 है।
स्टैकिंग जेल क्या है?
स्टैकिंग जेल एक कम सांद्रित पॉलीएक्रिलामाइड जेल है जिसे एसडीएस-पेज तकनीक में अधिक केंद्रित रिजॉल्विंग जेल (जेल को अलग करने) के शीर्ष पर रखा जाता है। स्टैकिंग जेल का उपयोग वैद्युतकणसंचलन के संकल्प को बेहतर बनाने के लिए किया जाता है। नमूने में प्रोटीन पर प्रभाव डालने वाले जेल और समाधान जेल की सांद्रता के बीच अंतर के कारण संकल्प बढ़ता है। चूंकि स्टैकिंग जेल में पॉलीएक्रिलामाइड की सांद्रता कम होती है, इसलिए रोमकूप का आकार अधिक होता है। यह अलगाव को बढ़ाने में भी मदद करता है।
स्टैकिंग जेल एक ढीला पॉलीएक्रिलामाइड जेल है जिसमें लगभग 7% पॉलीएक्रिलामाइड के बड़े छिद्र होते हैं। ये छिद्र बड़े प्रोटीन अणुओं के लिए एक महत्वपूर्ण अवरोध के रूप में कार्य नहीं करते हैं। इसलिए यह जेल उन प्रोटीनों की गतिशीलता पर थोड़ा प्रभाव डालता है। यह प्रोटीन की गतिशीलता और आकार के अनुसार उन्हें दो जैल के बीच में केंद्रित करके अलग करता है।
चित्र 01: एसडीएस-पेज एक्रिलामाइड जेल
स्टैकिंग जेल का पीएच 6.8 है। इसका पीएच 2 पीएच यूनिट द्वारा जेल को हल करने की तुलना में अम्लीय है। यह पीएच कम आयनिक शक्ति का तात्पर्य है इसलिए एक उच्च विद्युत प्रतिरोध। यह जेल में मौजूद अन्य आवेशित कणों की तुलना में प्रोटीन की गतिशीलता को उत्तेजित करता है।
सेपरेटिंग जेल क्या है?
SDS-PAGEtechnique का जेल या रिजॉल्विंग जेल को अलग करना एक अत्यधिक सांद्रित पॉलीएक्रिलामाइड जेल है जिसे कम केंद्रित स्टैकिंग जेल के शीर्ष पर रखा जाता है। पृथक करने वाले जेल में उच्च मात्रा में पॉलीएक्रिलामाइड (10%) होता है। इस जेल का पीएच पीएच=8.8 के रूप में बनाए रखा जाता है, जो कि स्टैकिंग जेल की तुलना में उच्च पीएच स्तर होता है।
चित्र 02: एक जेल वैद्युतकणसंचलन उपकरण
जब प्रोटीन अणु अलग करने वाले जेल तक पहुँचते हैं, तो उन अणुओं का प्रवास धीमा हो जाता है क्योंकि अलग करने वाला जेल एक छोटे छिद्र के आकार वाला एक उच्च सांद्रता वाला जेल होता है जो प्रोटीन अणुओं की गति के लिए काफी बाधा के रूप में कार्य कर सकता है।. यह धीमापन अन्य प्रोटीनों को पकड़ने के लिए धीरे-धीरे पलायन करने की अनुमति देता है, जिसके परिणामस्वरूप दो जैल के बीच एक संकीर्ण, केंद्रित बैंड बन जाता है।
स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल के बीच क्या संबंध है?
स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल दोनों प्रकार एक ही उपकरण में उपयोग किए जाते हैं।
स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल में क्या अंतर है?
स्टैकिंग जेल बनाम जेल अलग करना |
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| स्टैकिंग जेल एक कम सांद्रित पॉलीएक्रिलामाइड जेल है जिसे एसडीएस-पेज तकनीक में अधिक केंद्रित समाधान जेल (अलग करने वाले जेल) के शीर्ष पर रखा जाता है। | SDS-PAGE तकनीक का जेल या रिसोल्विंग जेल को अलग करना एक अत्यधिक केंद्रित पॉलीएक्रिलामाइड जेल है जिसे कम केंद्रित स्टैकिंग जेल के शीर्ष पर रखा जाता है। |
| प्लेसमेंट | |
| स्टैकिंग जेल को रिजॉल्विंग (अलग करने वाले) जेल पर रखा जाता है। | अलग करने वाले जेल को जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए उपयोग किए जाने वाले कंटेनर के तल पर रखा जाता है। |
| एकाग्रता | |
| स्टैकिंग जेल की सांद्रता अधिक होती है। | जेल को अलग करने की सांद्रता कम होती है। |
| पॉलीएक्रिलामाइड सामग्री | |
| स्टैकिंग जेल में लगभग 7% पॉलीएक्रिलामाइड होता है। | अलग करने वाले जेल में लगभग 10% पॉलीएक्रिलामाइड होता है। |
| पीएच | |
| स्टैकिंग जेल का पीएच 6.8 है। | पृथक करने वाले जेल का पीएच 8.8 है। |
| छिद्र का आकार | |
| स्टैकिंग जेल में बड़े रोम छिद्र मौजूद होते हैं। | सेपरेटिंग जेल में छोटे रोमछिद्रों के आकार मौजूद होते हैं। |
| संकल्प | |
| स्टैकिंग जेल बेहतर रिजॉल्यूशन देता है। | जेल को अलग करने से खराब रिजॉल्यूशन मिलता है। |
सारांश – स्टैकिंग जेल बनाम सेपरेटिंग जेल
स्टैकिंग जेल और अलग करने वाला जेल दो प्रकार के पॉलीएक्रिलामाइड जैल हैं जिनका उपयोग किसी दिए गए नमूने में प्रोटीन अणुओं के बेहतर पृथक्करण के लिए किया जाता है।स्टैकिंग जेल और अलग करने वाले जेल के बीच का अंतर यह है कि स्टैकिंग जेल का पीएच 6.8 है जबकि अलग करने वाले जेल का पीएच 8.8 है।
