मुख्य अंतर - एक्सोम बनाम आरएनए सीक्वेंसिंग
न्यूक्लिक एसिड अनुक्रमण वह तकनीक है जो किसी जीव के डीएनए या आरएनए के एक विशेष टुकड़े में न्यूक्लियोटाइड के क्रम को निर्धारित करती है। कोशिका के डीएनए और आरएनए मेकअप की पहचान करने और कुछ जीनों को अलग करने में अनुक्रमण महत्वपूर्ण है जो कार्यात्मक प्रोटीन के लिए कोड करते हैं; इस प्रकार, इन जीनों और जीन अभिव्यक्तियों के उत्परिवर्तन को समझने के लिए अनुक्रमण का उपयोग किया जा सकता है। सेंगर अनुक्रमण विधि या अधिक उन्नत अगली पीढ़ी अनुक्रमण विधियाँ अनुक्रमण विधियाँ हैं जिनका आमतौर पर उपयोग किया जाता है। एक्सोम सीक्वेंसिंग एक जीव में मौजूद एक्सॉन या कोडिंग डीएनए क्षेत्रों के पूरे सेट की सीक्वेंसिंग है जबकि आरएनए सीक्वेंसिंग राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) की सीक्वेंसिंग प्रक्रिया है।यह एक्सोम और आरएनए अनुक्रमण के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
एक्सोम सीक्वेंसिंग क्या है?
Exome जीनोम का एक उपसमुच्चय है जिसमें एक विशेष जीव के कोडिंग जीन होते हैं। कोडिंग जीन को एक्सॉन के रूप में नामित किया जाता है और उन्हें एमआरएनए में स्थानांतरित किया जाता है और फिर अमीनो एसिड अनुक्रमों में अनुवादित किया जाता है। पोस्ट ट्रांसक्रिप्शनल संशोधनों के दौरान, यूकेरियोट्स में आरएनए स्प्लिसिंग तंत्र इंट्रोन्स (गैर कोडिंग क्षेत्र) को हटा देता है, और एक्सॉन बने रहते हैं। दो मुख्य तकनीकें हैं जिनमें एक्सोम अनुक्रमण किया जाता है: समाधान आधारित और सरणी आधारित।
समाधान-आधारित एक्सोम अनुक्रमण में, डीएनए नमूनों को या तो प्रतिबंध एंजाइम या यांत्रिक विधि का उपयोग करके खंडित किया जाता है और गर्मी से विकृत किया जाता है। इस तकनीक में, बायोटिनाइलेटेड ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच (चारा) का उपयोग जीनोम में लक्षित क्षेत्रों के साथ चुनिंदा संकरण के लिए किया जाता है। बाइंडिंग स्टेप के लिए मैग्नेटिक स्ट्रेप्टाविडिन बीड्स का इस्तेमाल किया जाता है। बाइंडिंग के बाद एक धुलाई चरण होता है जहां अनबाउंड और गैर-लक्षित अनुक्रम धुल जाते हैं।बाध्य लक्ष्यों को तब पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) का उपयोग करके प्रवर्धित किया जाता है और फिर सेंगर अनुक्रमण या अगली पीढ़ी की अनुक्रमण तकनीकों का उपयोग करके अनुक्रमित किया जाता है।
चित्र 01: एक्सोम सीक्वेंसिंग
एरे आधारित विधि भी समाधान आधारित पद्धति के समान है, सिवाय इसके कि डीएनए अंशों को एक माइक्रो एरे में कैद कर लिया जाता है, और फिर अनुक्रमित होने से पहले बाइंडिंग और धुलाई के चरणों का पालन किया जाता है।
एक्सोम सीक्वेंसिंग का उपयोग कई अनुप्रयोगों में किया जाता है जैसे कि रोगों के आनुवंशिक निदान, जीन थेरेपी में, उपन्यास आनुवंशिक मार्करों की पहचान करने में, कृषि में विभिन्न लाभकारी कृषि संबंधी लक्षणों की पहचान करने और पौधों की प्रजनन प्रक्रियाओं में।
आरएनए अनुक्रमण क्या है?
आरएनए अनुक्रमण प्रतिलेख पर आधारित है, जो कोशिका का पूर्ण प्रतिलेख है।आरएनए अनुक्रमण के प्रमुख लक्ष्य जीन की ट्रांसक्रिप्शनल संरचना को निर्धारित करने और विकास के दौरान प्रत्येक ट्रांसक्रिप्ट के अभिव्यक्ति स्तरों को निर्धारित करने के लिए एमआरएनए, गैर-कोडिंग आरएनए, और छोटे आरएनए समेत ट्रांसक्रिप्ट की सभी प्रजातियों को सूचीबद्ध करना है। आरएनए अनुक्रमण के दौरान, संकरण प्रौद्योगिकियों (जो परिपक्व एमआरएनए अनुक्रमों से प्राप्त पूरक डीएनए थे) को शुरू में अनुक्रमण के लिए उपयोग किया गया था। वर्तमान में, आरएनए अनुक्रमण के लिए अधिक सटीक और उन्नत थ्रू-पुट तकनीक का उपयोग किया जाता है।
चित्र 02: आरएनए अनुक्रमण
आरएनए अनुक्रमण में, आरएनए का एक नमूना जो कुल आरएनए या अंशित आरएनए हो सकता है, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन का उपयोग करके इसके पूरक डीएनए (सीडीएनए) में परिवर्तित हो जाता है, और एक सीडीएनए पुस्तकालय तैयार किया जाता है। प्रत्येक सीडीएनए टुकड़ा दोनों पक्षों (जोड़ी अंत अनुक्रमण) या एक तरफ (एकल अंत अनुक्रमण) पर एडेप्टर से जुड़ा हुआ है।इन टैग किए गए अनुक्रमों को सेंगर अनुक्रमण या अगली पीढ़ी का उपयोग करके अनुक्रमित किया जाता है, जैसे एक्सोम अनुक्रमण।
एक्सोम और आरएनए सीक्वेंसिंग में क्या समानताएं हैं?
- लघु चयनित टुकड़े या डीएनए / आरएनए के पूरे सेट का उपयोग एक्सोम या आरएनए अनुक्रमण के लिए किया जा सकता है।
- अनुक्रमित अंश पुस्तकालयों में संरक्षित हैं।
- सेंगर अनुक्रमण या अगली पीढ़ी अनुक्रमण का उपयोग किया जा सकता है।
- दोनों इन विट्रो अनुक्रमण विधियाँ हैं।
- फ्लोरोसेंट टैग द्वारा अनुक्रमित टुकड़े निर्धारित किए जा सकते हैं।
एक्सोम और आरएनए सीक्वेंसिंग में क्या अंतर है?
एक्सोम बनाम आरएनए सीक्वेंसिंग |
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| एक्सोम सीक्वेंसिंग एक जीव में मौजूद एक्सॉन या कोडिंग डीएनए क्षेत्रों के पूरे सेट की सीक्वेंसिंग है। | आरएनए अनुक्रमण राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) की अनुक्रमण प्रक्रिया को संदर्भित करता है; प्रतिलेख। |
| नमूना शुरू करना | |
| जीनोमिक डीएनए एक्सोम सीक्वेंसिंग का प्रारंभिक नमूना है। | आरएनए आरएनए अनुक्रमण का प्रारंभिक नमूना है। |
| रचना | |
| इसमें कुल डीएनए के केवल कोडिंग क्षेत्र शामिल हैं जिन्हें एक्सॉन के रूप में जाना जाता है | इसमें RNA-mRNA / प्रतिलेख है। |
| अनुक्रमण | |
| एक्सोम सीक्वेंसिंग के दो मुख्य तरीके हैं; समाधान आधारित और सरणी आधारित प्रौद्योगिकियां। | आरएनए अनुक्रमण कुल आरएनए या खंडित आरएनए को निकालकर एक सीडीएनए पुस्तकालय की तैयारी के माध्यम से किया जाता है। |
सारांश - एक्सोम बनाम आरएनए सीक्वेंसिंग
एक्सोम एक जीव के कोडिंग क्षेत्रों का पूरा सेट है और एक्सोम के सटीक न्यूक्लियोटाइड क्रम के निर्धारण में शामिल तकनीकों को एक्सोम सीक्वेंसिंग के रूप में जाना जाता है। आरएनए अनुक्रमण एक जीव के आरएनए के न्यूक्लियोटाइड क्रम के निर्धारण में शामिल तकनीक है। यह एक्सोम और आरएनए अनुक्रमण के बीच का अंतर है।
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