मुख्य अंतर - डीएनए बनाम आरएनए एक्सट्रैक्शन
आणविक जीव विज्ञान, जैव प्रौद्योगिकी और आनुवंशिकी की बुनियादी अवधारणाओं को समझने के लिए डीएनए और आरएनए का अध्ययन महत्वपूर्ण पहलू हैं। इन अध्ययनों के दौरान प्रायोगिक प्रक्रियाओं को पूरा करने के लिए शुद्ध डीएनए और आरएनए नमूनों का निष्कर्षण आवश्यक है। डीएनए और आरएनए निष्कर्षण के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया डीएनए को शुद्ध करती है जबकि आरएनए निष्कर्षण आरएनए को शुद्ध करता है। डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया में तीन अलग-अलग चरण होते हैं: कोशिका लसीका और झिल्ली लिपिड और प्रोटीन का अपचय, केंद्रित नमक समाधान द्वारा कैटोबोलाइट्स का क्लंपिंग और इथेनॉल के साथ डीएनए की वर्षा।तीन चरण की प्रक्रिया में दो वैकल्पिक चरण शामिल हो सकते हैं। आरएनए शुद्धिकरण प्रक्रिया में चार अलग-अलग चरण होते हैं: सेल लिसिस के लिए गनीडियम थियोसाइनेट को जोड़ना, राइबोन्यूक्लिअस सहित प्रोटीन विकृतीकरण, क्लोरोफॉर्म और फिनोल के अलावा आरएनए को अलग करना और इथेनॉल का उपयोग करके अवक्षेप को धोना।
डीएनए निष्कर्षण क्या है?
डीएनए निष्कर्षण एक भौतिक और रासायनिक प्रक्रिया है जिसका उपयोग नमूने से डीएनए को शुद्ध करने के लिए किया जाता है। आणविक जीव विज्ञान और फोरेंसिक विज्ञान के संदर्भ में डीएनए निष्कर्षण एक महत्वपूर्ण पहलू है। प्रक्रिया तीन बुनियादी चरणों की है। प्रारंभ में, ब्याज की कोशिकाओं को प्राप्त किया जाना चाहिए। इसके बाद, कोशिका झिल्ली को तोड़ने के लिए कोशिका लसीका की सुविधा होती है, जो कोशिका को खोलती है और डीएनए के साथ कोशिका द्रव्य को उजागर करती है। सर्फेक्टेंट या अन्य डिटर्जेंट का उपयोग कोशिका झिल्ली से लिपिड को हटाने के लिए किया जा सकता है, जबकि मौजूद प्रोटीन प्रोटीज द्वारा अपचयित होते हैं। यह एक वैकल्पिक कदम है। एक बार जब कोशिका lysed हो जाती है, तो अपचयित अणुओं के झुरमुट को केंद्रित नमक समाधान द्वारा सुगम बनाया जाता है।इसके बाद विलयन का अपकेंद्रण होता है जो डीएनए से मलबे के गुच्छों को अलग करता है। इस चरण में, विभेदित डीएनए को कोशिका चक्र के दौरान उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों और लवणों के साथ मिलाया जाता है।
चित्र 01: डीएनए निष्कर्षण
इसे और अधिक शुद्ध करने के लिए निम्न चरणों का उपयोग किया जा सकता है। एक विधि इथेनॉल वर्षा है, जिसमें अलग डीएनए नमूने के साथ बर्फ के ठंडे इथेनॉल को मिलाना शामिल है। डीएनए अल्कोहल में अघुलनशील है और इस तरह डीएनए अणुओं के एक साथ एकत्र होने के कारण एक गोली का उत्पादन करता है। इस प्रक्रिया में आयनिक शक्ति को बढ़ाकर वर्षा की डिग्री बढ़ाने के लिए सोडियम एसीटेट जोड़ा जाता है। इसके लिए एथेनॉल वर्षा प्रक्रिया के अलावा फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण प्रक्रिया को भी प्रेरित किया जा सकता है। इस विधि में, फिनोल नमूने में मौजूद प्रोटीन का खंडन करता है।एक बार सेंट्रीफ्यूज किए जाने के बाद, विकृत प्रोटीन कार्बनिक चरण में रहेगा जबकि डीएनए अणु जो क्लोरोफॉर्म के साथ मिश्रित होते हैं, जलीय चरण में मौजूद रहेंगे। क्लोरोफॉर्म फिनोल अवशेषों को हटा देगा। एक बार निष्कर्षण पूरा हो जाने के बाद, डीएनए को TE बफर या अल्ट्रा शुद्ध पानी में घोलकर रखा जाता है।
आरएनए निष्कर्षण क्या है?
आरएनए शुद्धिकरण एक ऐसी प्रक्रिया है जिसके द्वारा जैविक नमूने से आरएनए को शुद्ध किया जाता है। कोशिकाओं और ऊतकों में राइबोन्यूक्लिअस की उपस्थिति के कारण, यह प्रक्रिया जटिल है। राइबोन्यूक्लीज एंजाइम में आरएनए को तेजी से नीचा दिखाने की क्षमता होती है। राइबोन्यूक्लिअस की रासायनिक प्रकृति अत्यंत स्थिर है, और उन्हें निष्क्रिय करना कठिन है। राइबोन्यूक्लिअस को निष्क्रिय करना एक विकल्प है। चूंकि यह एंजाइम कोशिकाओं और ऊतकों में सर्वव्यापी है, इसलिए आरएनए निष्कर्षण के लिए विशेष तकनीक विकसित की जाती है। कई विधियों में से, सामान्य विधि गुआनिडिनियम थियोसाइनेट-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण है।
चित्रा 02: आरएनए एक्सट्रैक्शन
गुआनिडिनियम थायोसाइनेट-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि सेंट्रीफ्यूजेशन और चरण पृथक्करण पर निर्भर करती है। सेंट्रीफ्यूज किए जाने वाले मिश्रण में जलीय नमूना और एक पानी संतृप्त घोल होता है जिसमें फिनोल और क्लोरोफॉर्म होता है। एक बार केंद्रापसारक होने के बाद, समाधान में ऊपरी जलीय चरण और तटस्थ पीएच स्थितियों (पीएच 7-8) के तहत एक निचला कार्बनिक चरण होता है। RNA जलीय प्रावस्था में उपस्थित होता है। कार्बनिक चरण में आमतौर पर फिनोल में घुले प्रोटीन और क्लोरोफॉर्म में घुले लिपिड होते हैं। एक कैओट्रोपिक एजेंट (एक अणु जो पानी के अणुओं के बीच हाइड्रोजन बांड को तोड़ने की क्षमता रखता है) जोड़ा जाता है; इसे गनीडिनियम थियोसाइनेट के रूप में जाना जाता है। इस एजेंट में प्रोटीन को अस्वीकार करने की क्षमता होती है जिसमें राइबोन्यूक्लिअस शामिल होते हैं जो आरएनए को नीचा दिखा सकते हैं और सेल लिसिस में शामिल होते हैं। यह rRNA को राइबोसोमल प्रोटीन से भी अलग करता है।आरएनए शुद्धि का अंतिम चरण जलीय चरण की वर्षा को इथेनॉल से धोना है। तरल नाइट्रोजन का उपयोग करके आरएनए को भी शुद्ध किया जा सकता है।
डीएनए और आरएनए निष्कर्षण के बीच समानताएं क्या हैं?
- दोनों निष्कर्षण प्रक्रियाएं फिनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे हानिकारक रसायनों का उपयोग करती हैं।
- सेंट्रीफ्यूजेशन दोनों प्रक्रियाओं के लिए एक आवश्यक तकनीक है।
- इथेनॉल का उपयोग अवक्षेप को धोने और शुद्ध डीएनए या आरएनए प्राप्त करने के लिए किया जाता है।
डीएनए और आरएनए एक्सट्रैक्शन में क्या अंतर है?
डीएनए बनाम आरएनए एक्सट्रैक्शन |
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| डीएनए निष्कर्षण एक ऐसी प्रक्रिया है जो किसी जीव या नमूने से डीएनए निकालती है। | आरएनए निष्कर्षण एक प्रक्रिया है जो एक नमूने से आरएनए को निकालती है। |
| कदम | |
| डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया दो वैकल्पिक चरणों के साथ तीन अलग-अलग चरणों से बनी है। | आरएनए निष्कर्षण प्रक्रिया चार अलग-अलग चरणों से बनी है। |
| अभिकर्मक | |
| डीएनए निष्कर्षण के लिए सर्फैक्टेंट, प्रोटीज (वैकल्पिक), अल्कोहल, क्लोरोफॉर्म, फिनोल, सोडियम एसीटेट का उपयोग किया जाता है। | आरएनए निष्कर्षण के लिए गुआनिडियम थायोसाइनेट, क्लोरोफॉर्म, फिनोल, इथेनॉल का उपयोग किया जाता है। |
सारांश – डीएनए बनाम आरएनए एक्सट्रैक्शन
डीएनए और आरएनए निष्कर्षण आणविक जीव विज्ञान, आनुवंशिकी और जैव प्रौद्योगिकी के अध्ययन के लिए प्रायोगिक प्रक्रियाओं के महत्वपूर्ण पहलू हैं। दोनों प्रक्रियाओं में समान अभिकर्मक शामिल हैं, लेकिन आरएनए निष्कर्षण एक विशेष अभिकर्मक का उपयोग करता है जिसे गुआनिडियम थियोसाइनेट के रूप में जाना जाता है जो राइबोन्यूक्लिअस की गतिविधि को कम करता है।यह डीएनए और आरएनए निष्कर्षण के बीच मुख्य अंतर है।
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