मुख्य अंतर - एसडीएस पेज बनाम वेस्टर्न ब्लॉट
वेस्टर्न ब्लॉटिंग एक ऐसी तकनीक है जो एक प्रोटीन के नमूने से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाती है। यह तकनीक कई प्रमुख चरणों के माध्यम से की जाती है: जेल वैद्युतकणसंचलन, सोख्ता, और संकरण। सोडियम डोडेसिल सल्फेट पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पेज) एक प्रकार की जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीक है जिसका उपयोग प्रोटीन को उनके आकार (आणविक भार) के अनुसार अलग करने के लिए किया जाता है। वेस्टर्न ब्लॉट एक ब्लॉटिंग मेम्ब्रेन की एक विशेष शीट होती है जिसका उपयोग एसडीएस पेज में प्रोटीन के समान पैटर्न को स्थानांतरित करने के लिए किया जाता है। एसडीएस पेज और वेस्टर्न ब्लॉट के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि एसडीएस पेज मिश्रण में प्रोटीन को अलग करने की अनुमति देता है जबकि वेस्टर्न ब्लॉट मिश्रण से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने और मात्रा का ठहराव की अनुमति देता है।दोनों प्रोटीन विश्लेषण अध्ययन में उपयोगी हैं।
एसडीएस पेज क्या है?
एसडीएस पेज एक जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीक है जिसका उपयोग प्रोटीन पृथक्करण के लिए किया जाता है। यह आमतौर पर जैव रसायन, आनुवंशिकी, फोरेंसिक और आणविक जीव विज्ञान में प्रयोग किया जाता है। एक बार नमूने से प्रोटीन निकालने के बाद, उन्हें एसडीएस और पॉलीएक्रिलामाइड से बने जेल पर चलाया जाता है। एसडीएस एक आयनिक डिटर्जेंट है जिसका उपयोग प्रोटीन (डिनेचर प्रोटीन) को रैखिक बनाने और उनके आणविक द्रव्यमान के आनुपातिक रैखिक प्रोटीन को नकारात्मक चार्ज प्रदान करने के लिए किया जाता है। Polyacrylamide जेल के लिए ठोस सहारा बन जाता है। विकृत प्रोटीन जो नकारात्मक रूप से चार्ज होते हैं, जेल के माध्यम से तंत्र के सकारात्मक छोर की ओर पलायन करते हैं। प्रोटीन के आकार के अनुसार, प्रवासन गति प्रोटीन के बीच भिन्न होती है और पृथक्करण होता है। इसलिए, एसडीएस पृष्ठ अलग-अलग प्रोटीनों को उनके आकार के आधार पर अलग करने के लिए उपयोगी है।
प्रोटीन के विभाजन के लिए पॉलीएक्रिलामाइड जेल तैयार करना एसडीएस पेज में एक महत्वपूर्ण कदम है।पॉलीएक्रिलामाइड की सही सांद्रता और उपयोग किए जाने वाले क्रॉस-लिंकिंग एजेंट का प्रकार जेल के भौतिक गुणों को दृढ़ता से प्रभावित करता है, जो विभिन्न प्रोटीनों को वास्तविक रूप से अलग करता है। प्रभावी पृथक्करण के लिए जेल के छिद्रों के आकार को ठीक से प्रबंधित किया जाना चाहिए। हालाँकि, SDS पृष्ठ को एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन प्रोटीन पृथक्करण तकनीक माना जाता है।
एसडीएस पृष्ठ तकनीक प्रोटीन विश्लेषण में एक प्रमुख सीमा है। चूंकि एसडीएस अलग होने से पहले प्रोटीन का खंडन करता है, यह एंजाइमी गतिविधि, प्रोटीन बाइंडिंग इंटरैक्शन, प्रोटीन कॉफ़ैक्टर्स आदि का पता लगाने की अनुमति नहीं देता है।
चित्र 01: एसडीएस पृष्ठ
वेस्टर्न ब्लॉट क्या है?
वेस्टर्न ब्लॉटिंग तकनीक प्रोटीन मिश्रण से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने और प्रोटीन की मात्रा और आणविक भार को मापने में सक्षम बनाती है।वेस्टर्न ब्लॉट वह झिल्ली है जिसका उपयोग ब्लॉटिंग प्रक्रिया के दौरान एसडीएस-पॉलीएक्रिलामाइड जेल में प्रोटीन पैटर्न की दर्पण छवि प्राप्त करने के लिए किया जाता है। पश्चिमी सोख्ता के लिए उपयोग की जाने वाली झिल्ली ज्यादातर नाइट्रोसेल्यूलोज या पॉलीविनाइलिडिन डिफ्लुओराइड (PVDF) से बनी होती है। स्थानांतरित प्रोटीन के साथ झिल्ली का उपयोग वांछित प्रोटीन की पहचान करने के लिए किया जा सकता है। संकरण द्वारा वांछित प्रोटीन का पता लगाने के लिए इसे उच्च गुणवत्ता वाले एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है। एंटीबॉडी अपने विशिष्ट प्रतिजन से बांधता है और वांछित प्रतिजन की उपस्थिति को प्रकट करता है जो एक प्रोटीन है।
एसडीएस पॉलीएक्रिलामाइड जेल से पश्चिमी धब्बा में प्रोटीन का स्थानांतरण इलेक्ट्रोब्लॉटिंग द्वारा किया जाता है। यह एक प्रभावी और तेज़ तरीका है जो प्रोटीन को जेल से बाहर इलेक्ट्रोफोरेस करने और नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली (पश्चिमी धब्बा) पर जाने का कारण बनता है।
चित्र 02: पश्चिमी धब्बा
एसडीएस पेज और वेस्टर्न ब्लॉट में क्या अंतर है?
एसडीएस पेज बनाम वेस्टर्न ब्लॉट |
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| एसडीएस पेज एक जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीक है। | पश्चिमी धब्बा एक तकनीक है जो एक मिश्रण से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने के लिए एक झिल्ली पर किया जाता है। |
| उपयोग | |
| एसडीएस पृष्ठ प्रोटीन को उनके आकार के अनुसार अलग करने की अनुमति देता है। | पश्चिमी धब्बा अपने पैटर्न को बदले बिना एसडीएस पेज जेल पर प्रोटीन के हस्तांतरण की अनुमति देता है और विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ संकरण की अनुमति देता है। |
| नुकसान | |
| प्रोटीन विकृतीकरण, उच्च लागत, और न्यूरोटॉक्सिन रसायनों की उपस्थिति इस तकनीक के नुकसान हैं। | यह तकनीक समय लेने वाली है और इसके लिए एक अच्छे अनुभवी व्यक्तिगत और विशिष्ट नियंत्रित परिस्थितियों की आवश्यकता होती है। |
सारांश – एसडीएस पेज बनाम वेस्टर्न ब्लॉट
एसडीएस पेज और वेस्टर्न ब्लॉट प्रोटीन विश्लेषण में शामिल दो तरीके हैं। एसडीएस पेज जेल पर प्रोटीन को उनके आणविक भार के अनुसार आसानी से अलग करने की अनुमति देता है। पश्चिमी धब्बा विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ संकरण के माध्यम से एक विशिष्ट प्रोटीन की उपस्थिति और मात्रा की पुष्टि करने में मदद करता है। एसडीएस पेज और वेस्टर्न ब्लॉट में यही अंतर है।
