मुख्य अंतर - एसडीएस पेज बनाम नेटिव पेज
एसडीएस और नेटिव पेज दो प्रकार की पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीकें हैं जिनका उपयोग आणविक जीव विज्ञान में किया जाता है। एसडीएस पेज और नेटिव पेज के बीच महत्वपूर्ण अंतर पॉलीएक्रिलामाइड जेल का उपयोग किया जाता है। एसडीएस पृष्ठ में एक विकृतीकरण जेल का उपयोग किया जाता है, इसलिए अणुओं को उनके आणविक भार के आधार पर अलग किया जाता है। इसके विपरीत, नेटिव पेज में, नॉन-डिनाट्यूरिंग जैल का उपयोग किया जाता है। इसलिए अणुओं को उनके आकार, आवेश और आकार के आधार पर अलग किया जाता है।
पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (पेज) मेथिलीन बाइसैक्रिलामाइड के साथ एक्रिलामाइड मोनोमर्स को पोलीमराइज़ करके बनाए गए जेल का उपयोग करता है।पॉलीएक्रिलामाइड agarose की तुलना में कठिन और अधिक गर्मी स्थिर है। पॉलीएक्रिलामाइड जैल का छिद्र आकार छोटा होता है जो प्रोटीन के कुशल पृथक्करण को सक्षम बनाता है। एसडीएस पेज और नेटिव पेज नाम के दो मुख्य प्रकार के पेज सेटअप हैं। एसडीएस पेज या सोडियम-डोडेसिल सल्फेट पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन प्रोटीन को उनके आणविक भार के आधार पर अलग करता है। एसडीएस पेज में डिनाट्यूरिंग जैल का उपयोग किया जाता है। नेटिव पेज नॉन-डिनाट्यूरिंग जैल का उपयोग करता है और प्रोटीन को उनके आकार, आवेश और आकार (3D संरचना) के आधार पर अलग करता है।
एसडीएस पेज क्या है?
एसडीएस पेज सबसे आम इलेक्ट्रोफोरेटिक तकनीक है जिसका उपयोग प्रोटीन को उनके आणविक भार के आधार पर अलग करने के लिए किया जाता है। जेल एसडीएस (सोडियम डोडेसिल सल्फेट) को मिलाकर बनाया जाता है, जो एक डिटर्जेंट है। एसडीएस डेन्चर प्रोटीन को मोनोमर्स में बदल देता है। एसडीएस एक आयनिक डिटर्जेंट है। इसलिए, यह एक विस्तृत पीएच रेंज के भीतर प्रोटीन के लिए एक शुद्ध नकारात्मक चार्ज जोड़ता है। जब प्रोटीन अणुओं पर शुद्ध ऋणात्मक आवेश लगाया जाता है, तो आवेश भिन्नता के कारण जटिल संरचनाएँ टूट जाती हैं।ऋणात्मक आवेश के कारण प्रोटीन धनात्मक सिरे की ओर आकर्षित होते हैं। इस प्रकार कम आणविक भार वाले अणु जेल मैट्रिक्स पर तेजी से यात्रा करते हैं और एनोड के करीब देखे जा सकते हैं, जबकि उच्च आणविक भार प्रोटीन कुओं के करीब देखे जाते हैं।
चित्र 01: एसडीएस पृष्ठ
पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला के लिए बाध्यकारी एसडीएस इसके सापेक्ष आणविक द्रव्यमान के समानुपाती होता है। इसलिए, आणविक द्रव्यमान को एसडीएस पेज के माध्यम से भी निर्धारित किया जा सकता है। एसडीएस पेज जैल का धुंधलापन ब्रोमोफेनॉल ब्लू स्टेनिंग द्वारा किया जाता है। एसडीएस पेज रेंज के अनुप्रयोग काफी हद तक जहां इसका उपयोग सापेक्ष आणविक द्रव्यमान का अनुमान लगाने और प्रोटीन मिश्रण में प्रोटीन की सापेक्ष बहुतायत को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है। एसडीएस पेज का उपयोग प्रोटीन के मिश्रण में प्रोटीन वितरण को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है।एसडीएस पेज प्रोटीन को शुद्ध करने और उसका आकलन करने के लिए भी लागू किया जाता है। इसका उपयोग पश्चिमी सोख्ता और संकरण के लिए प्रारंभिक प्रक्रिया के रूप में किया जाता है, जो बदले में प्रोटीन मानचित्रण और पहचान के लिए उपयोग किया जाता है।
मूल पृष्ठ क्या है?
Native Polyacrylamide gel वैद्युतकणसंचलन (मूल पृष्ठ) एक गैर-विकृतीकरण जेल का उपयोग करता है। इसलिए, एसडीएस या कोई अन्य विकृतीकरण एजेंट जेल मैट्रिक्स में नहीं जोड़ा जाता है। नेटिव पेज में, प्रोटीन का पृथक्करण प्रोटीन के आवेश और आकार पर आधारित होता है। इसलिए, प्रोटीन की गतिशीलता प्रोटीन के आवेश और आकार पर निर्भर करती है।
प्रोटीन का चार्ज अमीनो एसिड की साइड चेन पर निर्भर करता है। यदि पार्श्व जंजीरों पर ऋणात्मक आवेश होता है, तो प्रोटीन को समग्र ऋणात्मक आवेश प्राप्त होगा और इसके विपरीत। तह होने के कारण प्रोटीन एक 3डी संरचना बनाए रखते हैं। डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड, हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन और हाइड्रोजन बॉन्ड जैसे प्रोटीन में कई बॉन्ड प्रकारों से फोल्डिंग परिणाम।इसलिए, यदि मूल पृष्ठ को तटस्थ pH पर ले जाया जाता है, तो प्रोटीन को प्रोटीन के आणविक आकार के अनुसार अलग किया जाएगा। इसलिए, नेटिव पेज को प्रोटीन के प्रभारी परिवर्तन या संरचना का पता लगाने के लिए एक संवेदनशील तकनीक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
नेटिव पेज का मुख्य लाभ यह है कि पेज विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला प्रोटीन पेज विश्लेषण के बाद अपनी मूल स्थिति में वापस आ सकता है, क्योंकि प्रक्रिया के दौरान प्रोटीन परेशान नहीं होता है। नेटिव पेज अपेक्षाकृत उच्च थ्रूपुट तकनीक है, और प्रोटीन की स्थिरता बढ़ जाती है।
चित्र 02: मूल पृष्ठ
जेल रन पूरा होने पर, नेटिव पेज जेल को ब्रोमोफेनॉल ब्लू या किसी अन्य उपयुक्त धुंधला अभिकर्मक के साथ धुंधला करके देखा जा सकता है। नेटिव पेज के अनुप्रयोगों में ग्लाइकोप्रोटीन जैसे मानव पुनः संयोजक एरिथ्रोपोइटिन या बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) में मौजूद प्रोटीन की पहचान सहित अम्लीय प्रोटीन को अलग करना शामिल है।
एसडीएस पेज और नेटिव पेज में क्या समानताएं हैं?
- एसडीएस पेज और नेटिव पेज सिस्टम दोनों जेल के मैट्रिक्स के रूप में पॉलीएक्रिलामाइड जेल का उपयोग करते हैं।
- दोनों का उपयोग प्रोटीन के पृथक्करण और पहचान के लिए किया जाता है।
- दोनों यौगिकों को अलग करने के लिए इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता का उपयोग करते हैं।
- दोनों को लंबवत या क्षैतिज तरीके से किया जा सकता है (ज्यादातर वर्टिकल पेज सेटअप के रूप में किया जाता है क्योंकि रन की लंबाई अधिक होती है)।
- दोनों तकनीकों के संचालन के लिए जेल टैंक, कंघी, बिजली आपूर्ति सहित वैद्युतकणसंचलन उपकरण की आवश्यकता होती है।
- जेल की कल्पना दोनों तकनीकों में धुंधला तरीकों से की जा सकती है।
एसडीएस पेज और नेटिव पेज में क्या अंतर है?
एसडीएस पेज बनाम नेटिव पेज |
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| एसडीएस पेज या सोडियम-डोडेसिल सल्फेट पेज प्रोटीन को उनके आणविक भार के आधार पर अलग करता है, और यह एक विकृतीकरण जेल का उपयोग करता है। | Native Page नॉन-डिनाट्यूरिंग जैल का उपयोग करता है और प्रोटीन को उनके आकार, आवेश और आकार (3D संरचना) के आधार पर अलग करता है। |
| जेल का प्रकार | |
| एसडीएस-पेज में एक डिनेट्यूरिंग जेल का उपयोग किया जाता है। | देशी पृष्ठ में एक गैर-विकृतीकरण जेल का उपयोग किया जाता है। |
| एसडीएस की उपस्थिति | |
| एसडीएस पृष्ठ में नमूने पर नकारात्मक चार्ज लगाने के लिए डिटर्जेंट के रूप में एसडीएस मौजूद है। | एसडीएस नेटिव पेज में मौजूद नहीं है। |
| अलगाव का आधार | |
| प्रोटीन का पृथक्करण एसडीएस पृष्ठ में प्रोटीन के आणविक भार पर निर्भर करता है। | पृथक्करण मूल पृष्ठ में प्रोटीन अणु के आकार और आकार पर निर्भर करता है। |
| प्रोटीन की स्थिरता | |
| एसडीएस पेज में प्रोटीन की स्थिरता कम है। | मूल पृष्ठ में प्रोटीन की स्थिरता अधिक है। |
| मूल प्रोटीन की रिकवरी | |
| संभव नहीं है क्योंकि यह एसडीएस पेज में विकृत है। | मूल पृष्ठ पर संभव। |
सारांश – एसडीएस पेज बनाम नेटिव पेज
SDS पेज और नेटिव पेज दो प्रकार की Polyacrylamide gel वैद्युतकणसंचलन तकनीकें हैं जिनका उपयोग प्रोटीन को अलग करने के लिए किया जाता है। एसडीएस पेज का इलाज एसडीएस नामक डिटर्जेंट से किया जाता है। एसडीएस प्रोटीन को एक समग्र नकारात्मक चार्ज प्रदान करता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन का विकृतीकरण होता है।इसलिए, प्रोटीन को उनके आणविक भार के आधार पर अलग किया जाता है। इसके विपरीत, नेटिव पेज तकनीक किसी भी विकृतीकरण एजेंट का उपयोग नहीं करती है। इस प्रकार प्रोटीन या तो उनके आकार या आकार के आधार पर अलग हो जाते हैं। एसडीएस पेज और नेटिव पेज में यही अंतर है।
