मुख्य अंतर - जांच बनाम प्राइमर
आणविक जांच एक छोटा डीएनए या आरएनए टुकड़ा है जो डीएनए या आरएनए में पूरक अनुक्रमों को पहचानता है और लक्ष्य अनुक्रम की पहचान की अनुमति देता है। प्राइमर डीएनए या आरएनए का एक छोटा सा खंड है जो डीएनए संश्लेषण के लिए एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में कार्य करता है। प्राइमर और प्रोब टेम्प्लेट डीएनए या लक्ष्य डीएनए के पूरक न्यूक्लियोटाइड के साथ संकरण करते हैं। हालाँकि, जांच और प्राइमर के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि डीएनए प्रतिकृति के लिए प्राइमर आवश्यक हैं जबकि नमूना डीएनए में विशिष्ट अनुक्रमों का पता लगाने के लिए जांच आवश्यक है।
जांच क्या है?
जांच डीएनए या आरएनए का एक छोटा सा टुकड़ा है जिसका उपयोग आणविक संकरण द्वारा नमूने में लक्ष्य डीएनए या आरएनए का पता लगाने के लिए किया जाता है।उन्हें आणविक मार्कर के रूप में भी जाना जाता है। जांच की लंबाई भिन्न हो सकती है (100 से 1000 आधार), और जांच न्यूक्लियोटाइड लक्ष्य अनुक्रम के भाग के पूरक हैं। पता लगाने में आसानी के लिए, जांच को रेडियोधर्मी समस्थानिक या फ्लोरोसेंट रंजक या एंटीबॉडी के साथ लेबल किया जाता है। जांच लक्ष्य अनुक्रम के पूरक आधारों से जुड़ती है और नमूने में लक्ष्य डीएनए या आरएनए की उपस्थिति को प्रकट करती है। प्रोब को लेबल करने की दो मुख्य विधियाँ हैं: एंड लेबलिंग और निक ट्रांसलेशन। जांच को डीएनए जांच, आरएनए जांच, सीडीएनए जांच और सिंथेटिक ओलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच सहित विभिन्न प्रकारों में वर्गीकृत किया जाता है, और वे विभिन्न तकनीकों का उपयोग करके तैयार किए जाते हैं।
जांच कई माइक्रोबियल और आणविक क्षेत्रों जैसे कि वायरोलॉजी, फोरेंसिक पैथोलॉजी, पितृत्व परीक्षण, डीएनए फिंगरप्रिंटिंग, आनुवंशिक रोगों का पता लगाने, RFLP, आणविक साइटोजेनेटिक्स, स्वस्थानी संकरण, आदि में महत्वपूर्ण उपकरण हैं।
चित्र 01: रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए FISH में प्रयुक्त फ्लोरोसेंटली लेबल वाली जांच
प्राइमर क्या है?
प्राइमर एक छोटा डीएनए या आरएनए टुकड़ा है जो डीएनए संश्लेषण के लिए एक सर्जक के रूप में कार्य करता है। डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम प्राइमर अनुक्रम के 3 'ओएच समूह में न्यूक्लियोटाइड जोड़ता है और टेम्पलेट डीएनए के पूरक नए स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है। प्राइमर बहुत छोटे टुकड़े होते हैं जिनकी लंबाई 18 से 20 न्यूक्लियोटाइड्स होती है। इन विट्रो डीएनए एम्प्लीफिकेशन (पीसीआर) के लिए प्रयोगशाला में इन्हें रासायनिक रूप से संश्लेषित किया जाता है। प्राइमर में न्यूक्लियोटाइड का कोई भी क्रम हो सकता है क्योंकि वे उपयोगकर्ता द्वारा डिज़ाइन किए गए हैं। उन्हें टेम्प्लेट डीएनए के पूरक आधारों के साथ मिलान करने के लिए संश्लेषित किया जाता है। इसलिए, इसमें न्यूक्लियोटाइड का कोई भी क्रम हो सकता है। डीएनए प्रतिकृति के लिए प्राइमरों का अत्यधिक महत्व है क्योंकि डीएनए पोलीमरेज़ डीएनए के पहले से मौजूद टुकड़े के बिना नए डीएनए को संश्लेषित नहीं कर सकता है। पीसीआर के लिए प्राइमरों को डिजाइन करते समय, निम्नलिखित बातों पर विचार करने की आवश्यकता है:
- प्राइमर्स में डीएनए के पार्श्व छोर तक पूरक न्यूक्लियोटाइड होना चाहिए जो बढ़ाना चाहता है।
- प्राइमर्स में पिघलने का तापमान 55 - 65 के बीच होना चाहिए 0C
- जी और सी सामग्री 50 से 60% के बीच होनी चाहिए।
पीसीआर में दो प्राइमरों का उपयोग सैंपल डीएनए के दोनों स्ट्रैंड को दोहराने के लिए फॉरवर्ड और रिवर्स के रूप में किया जाता है। प्राइमर का उपयोग आमतौर पर पीसीआर और डीएनए अनुक्रमण करने के लिए किया जाता है।
चित्र 02: पीसीआर में प्राइमर एनीलिंग
जांच और प्राइमर में क्या अंतर है?
जांच बनाम प्राइमर |
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| जांच डीएनए/आरएनए का एक छोटा सा टुकड़ा है जिसका उपयोग आणविक संकरण द्वारा नमूने में लक्ष्य अनुक्रम की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। | प्राइमर डीएनए या आरएनए का एक छोटा सा खंड है जो डीएनए प्रतिकृति के लिए एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में कार्य करता है। |
| कार्य | |
| यह डीएनए या आरएनए के नमूने में एक विशिष्ट अनुक्रम की उपस्थिति का पता लगाता है। | यह डीएनए संश्लेषण के लिए एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में कार्य करता है। |
| लंबाई | |
| लंबाई 100-1000 आधारों की सीमा में हो सकती है | लंबाई आम तौर पर लगभग 18 – 20 आधार होती है |
| पूरक अनुक्रम के साथ बाइंडिंग | |
| जांच लक्ष्य अनुक्रम के पूरक आधारों के साथ संकरण करता है | डीएनए स्ट्रैंड के पूरक आधारों के साथ प्राइमर एनील करता है। |
| लेबलिंग | |
| जांच को आसानी से पता लगाने के लिए लेबल किया जाता है | प्राइमर्स आमतौर पर लेबल नहीं होते हैं |
| पीसीआर में प्रयोग करें | |
| पीसीआर में जांच का उपयोग नहीं किया जाता है | पीसीआर में प्राइमर का इस्तेमाल किया जाता है |
सारांश – जांच बनाम प्राइमर
जांच डीएनए या आरएनए अनुक्रम का एक छोटा सा टुकड़ा है जिसे नमूने में लक्ष्य अनुक्रम का पता लगाने के लिए पूरक न्यूक्लियोटाइड के साथ संकरण किया जा सकता है। लक्ष्य अनुक्रम की उपस्थिति को देखने के लिए जांच को रेडियोधर्मी, प्रतिरक्षाविज्ञानी या फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किया जाता है। प्राइमर एक बहुत छोटा डीएनए या आरएनए टुकड़ा है जो इन विट्रो डीएनए प्रवर्धन के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में कार्य करता है। डीएनए पोलीमरेज़ 3 'ओएच समूह प्राइमर की पहचान करता है और टेम्पलेट के पूरक नए स्ट्रैंड के निर्माण की शुरुआत करता है। प्रोब और प्राइमर पूरक न्यूक्लियोटाइड के साथ संकरण करके समान रूप से काम करते हैं।इस प्रकार, प्रोब और प्राइमर के बीच मुख्य अंतर उनका प्रमुख कार्य है।
