मुख्य अंतर एफपीएलसी और एचपीएलसी यह है कि एफपीएलसी एक प्रकार का तरल क्रोमैटोग्राफी है जो प्रोटीन, न्यूक्लियोटाइड और पेप्टाइड्स जैसे बड़े बायोमोलेक्यूल्स को शुद्ध करता है, जबकि एचपीएलसी एक प्रकार का तरल क्रोमैटोग्राफी है जो छोटे आणविक भार यौगिकों को अलग करता है।
लिक्विड क्रोमैटोग्राफी एक तकनीक है जिसका उपयोग एक नमूने को उसके अलग-अलग घटकों में अलग करने के लिए किया जाता है। यह अलगाव मोबाइल और स्थिर चरणों के साथ विशिष्ट नमूनों की बातचीत के कारण होता है। तरल क्रोमैटोग्राफी में मोबाइल चरण के लिए प्रत्येक घटक की आत्मीयता के आधार पर एक नमूने के घटकों को अलग किया जाता है। जैसे ही मोबाइल चरण और नमूना एक कॉलम से गुजरते हैं, नमूने के घटक बैंड में अलग होने लगते हैं जिन्हें यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया जा सकता है।इसलिए, एफपीएलसी और एचपीएलसी दो प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी तकनीक हैं।
एफपीएलसी क्या है?
FPLC एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जो प्रोटीन, न्यूक्लियोटाइड और पेप्टाइड्स जैसे बड़े जैव-अणुओं को शुद्ध करती है। फास्ट प्रोटीन लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (FPLC) को पहली बार 1982 में फार्माशिया कंपनी द्वारा स्वीडन में विकसित और विपणन किया गया था। इसका उपयोग अक्सर प्रोटीन मिश्रण का विश्लेषण या शुद्ध करने के लिए किया जाता है। यह गतिमान द्रव (मोबाइल चरण) और एक झरझरा ठोस सामग्री (स्थिर चरण) के लिए नमूना घटकों की समानता के सिद्धांत के आधार पर होता है। FPLC में, मोबाइल चरण एक बफर है, और स्थिर चरण मोतियों से बना एक राल है। इसमें आमतौर पर एक बेलनाकार कांच या प्लास्टिक के कॉलम में पैक किए गए क्रॉस-लिंक्ड agarose होते हैं।
चित्र 01: एफएलपीसी (फास्ट प्रोटीन लिक्विड क्रोमैटोग्राफी) उपकरण
अधिकांश एफएलपीसी रणनीति में आयन एक्सचेंज रेजिन का उपयोग किया जाता है। इसलिए, ब्याज की प्रोटीन एक चार्ज इंटरेक्शन द्वारा राल से बंधेगी। FLPC तकनीक दो बफ़र्स का भी उपयोग करती है: बफ़र 1 (चल रहा बफ़र) और बफ़र 2 (रेफरेंस बफ़र)। प्रारंभ में, जब बफर और नमूना मिश्रण स्तंभ के माध्यम से चलता है, तो मिश्रण में रुचि का प्रोटीन चार्ज इंटरैक्शन द्वारा राल से बंध जाएगा। लेकिन ब्याज की प्रोटीन अलग हो जाती है और रेफरेंस बफर में समाधान पर लौट आती है जब रेफरेंस बफर प्रक्रिया के अंत में कॉलम के माध्यम से चलता है। बाद में, समाधान (एलुएंट जिसमें रुचि का प्रोटीन होता है) दो डिटेक्टरों से गुजरता है, जो नमक एकाग्रता और प्रोटीन एकाग्रता को मापते हैं। जैसा कि प्रत्येक प्रोटीन को अलग किया जाता है, यह पता लगाने के दौरान एक "शिखर" के रूप में प्रकट होता है और इसे आगे के उपयोग के लिए एकत्र किया जा सकता है।
एचपीएलसी क्या है?
एचपीएलसी एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जो छोटे आणविक भार यौगिकों को अलग करती है। 1969 में, पहला एचपीएलसी व्यावसायिक रूप से वाटर्स कॉर्पोरेशन, यूएसए द्वारा निर्मित किया गया था।उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) में, विलायक (मोबाइल चरण) में एक नमूना मिश्रण (विश्लेषण) को उच्च दबाव पर क्रोमैटोग्राफिक पैकिंग सामग्री (स्थिर चरण) के साथ एक कॉलम के माध्यम से पंप किया जाता है। नमूना मिश्रण हीलियम या नाइट्रोजन की एक चलती वाहक गैस धारा द्वारा ले जाया जाता है।
चित्र 02: एचपीएलसी (उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी)
नमूना मिश्रण के वे घटक जिनका स्थिर चरण के साथ कम से कम इंटरैक्शन होता है या मोबाइल चरण के साथ सबसे अधिक इंटरैक्शन होता है, वे कॉलम से तेज़ी से बाहर निकलेंगे। दूसरी ओर, नमूना मिश्रण के घटक जिनमें स्थिर चरण के साथ सबसे अधिक मात्रा में बातचीत होती है या मोबाइल चरण के साथ कम से कम बातचीत होती है, वे कॉलम धीमे से बाहर निकल जाएंगे। उपरोक्त अंतःक्रिया सिद्धांत के आधार पर, नमूना मिश्रण के घटकों को अलग किया जा सकता है।इसके अलावा, इंस्ट्रूमेंट डिटेक्टर नमूना मिश्रण के प्रत्येक घटक की पहचान करता है जो कॉलम से बाहर निकलता है। एचपीएलसी का उपयोग दवाओं, विषाक्त पदार्थों या कीटनाशकों जैसे ज्ञात यौगिकों की उपस्थिति या अनुपस्थिति के लिए पर्यावरण और जैविक नमूनों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है। इसका उपयोग विभिन्न उद्योगों जैसे फार्मास्युटिकल, पर्यावरण, फोरेंसिक और रसायनों में किया जाता है।
एफपीएलसी और एचपीएलसी में क्या समानताएं हैं?
- एफपीएलसी और एचपीएलसी तरल क्रोमैटोग्राफी के प्रकार हैं।
- दोनों का उपयोग जैविक नमूनों को अलग करने और पहचानने के लिए किया जाता है।
- उनके पास एक तरल मोबाइल चरण और एक ठोस स्थिर चरण है।
- दोनों तकनीक नमूने से गुजरने के लिए एक कॉलम का उपयोग करती हैं।
- ये तकनीक नमूना पृथक्करण और पता लगाने के लिए पंप, डिटेक्टर, वाल्व और सॉफ्टवेयर का उपयोग करती हैं।
एफपीएलसी और एचपीएलसी में क्या अंतर है?
FPLC एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जिसका उपयोग प्रोटीन, न्यूक्लियोटाइड और पेप्टाइड्स जैसे बड़े जैव-अणुओं को शुद्ध करने के लिए किया जाता है।एचपीएलसी एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जिसका उपयोग छोटे आणविक भार यौगिकों को अलग करने के लिए किया जाता है। तो, यह FPLC और HPLC के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, एफपीएलसी पीएच और चालकता मॉनिटर के साथ-साथ अंश संग्राहकों का उपयोग करता है। इसके विपरीत, एचपीएलसी पीएच और चालकता मॉनिटर और अंश संग्राहकों का उपयोग नहीं करता है।
नीचे दिए गए इन्फोग्राफिक में एफपीएलसी और एचपीएलसी के बीच अधिक अंतर को सारणीबद्ध रूप में सूचीबद्ध किया गया है।
सारांश - एफपीएलसी बनाम एचपीएलसी
क्रोमैटोग्राफी एक प्रयोगशाला विश्लेषणात्मक तकनीक है जिसका उपयोग मिश्रण से घटकों को अलग करने के लिए किया जाता है। इसे कई प्रकारों में विभाजित किया जाता है जैसे कॉलम क्रोमैटोग्राफी, गैस क्रोमैटोग्राफी, लिक्विड क्रोमैटोग्राफी, आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, आदि। FPLC और HPLC दो प्रकार की लिक्विड क्रोमैटोग्राफी तकनीक हैं। एफपीएलसी एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जिसका उपयोग प्रोटीन, न्यूक्लियोटाइड और पेप्टाइड्स जैसे बड़े बायोमोलेक्यूल्स को शुद्ध करने के लिए किया जाता है। दूसरी ओर, एचपीएलसी एक प्रकार की तरल क्रोमैटोग्राफी है जिसका उपयोग छोटे आणविक भार यौगिकों को अलग करने के लिए किया जाता है।इस प्रकार, यह सारांश है कि FPLC और HPLC में क्या अंतर है।
