मुख्य अंतर - ग्राम दाग बनाम एसिड फास्ट
जीवाणु बहुत छोटे सूक्ष्मजीव होते हैं। वे पारदर्शी हैं, और जीवित और बिना दाग वाली परिस्थितियों में उनका पता लगाना मुश्किल है। इस प्रकार, बैक्टीरिया का पता लगाने की सुविधा के लिए विभिन्न धुंधला तरीकों का विकास किया जाता है। तीन प्रमुख प्रकार की धुंधला तकनीकें हैं: साधारण धुंधलापन, विभेदक धुंधलापन और संरचनात्मक धुंधलापन। डिफरेंशियल स्टेनिंग एक ऐसी तकनीक है जो बैक्टीरिया में अंतर करने के लिए एक से अधिक दागों का उपयोग करती है। ग्राम दाग और एसिड-फास्ट दाग सबसे लोकप्रिय रूप से अंतर दाग के रूप में जाने जाते हैं। ग्राम स्टेनिंग एक डिफरेंशियल स्टेनिंग तकनीक है, जो बैक्टीरिया को दो समूहों में विभाजित करती है जिन्हें ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया के रूप में जाना जाता है।एसिड-फास्ट दाग एक विभेदक दाग है जिसका उपयोग एसिड-फास्ट जीवों जैसे कि माइकोबैक्टीरियम को गैर-एसिड फास्ट जीवों से पहचानने के लिए किया जाता है। यह ग्राम दाग और एसिड फास्ट दाग के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
ग्राम दाग क्या है?
चने का दाग सूक्ष्म जीव विज्ञान में बैक्टीरिया की पहचान के लिए उपयोग की जाने वाली एक महत्वपूर्ण अंतर धुंधला तकनीक है। इस तकनीक को डेनिश बैक्टीरियोलॉजिस्ट हंस क्रिश्चियन ग्राम ने 1884 में पेश किया था। ग्राम धुंधला बैक्टीरिया को ग्राम पॉजिटिव और ग्राम नेगेटिव नामक दो प्रमुख समूहों में वर्गीकृत करता है, जो बैक्टीरिया वर्गीकरण और पहचान में बहुत महत्वपूर्ण हैं। माइक्रोबायोलॉजिस्ट अपने अध्ययन के दौरान बैक्टीरिया के लक्षण वर्णन में एक प्रारंभिक चरण के रूप में चने का धुंधलापन करते हैं।
जीवाणुओं को उनकी कोशिका भित्ति में अंतर के आधार पर वर्गीकृत किया जाता है। ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया उनकी कोशिका भित्ति में एक मोटी पेप्टिडोग्लाइकन परत से बना होता है जबकि ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया उनकी कोशिका भित्ति में एक पतली पेप्टिडोग्लाइकन परत से बना होता है। चने के धुंधलापन का परिणाम कोशिका भित्ति की पेप्टिडोग्लाइकन परत की मोटाई में अंतर पर आधारित होगा।
चार अलग-अलग अभिकर्मकों का उपयोग करके ग्राम धुंधलापन किया जाता है; प्राथमिक दाग, चुभने वाला, रंग बदलने वाला एजेंट और काउंटर दाग। क्रिस्टल वायलेट और सेफ्रेनिन का उपयोग क्रमशः प्राथमिक और काउंटर दाग के रूप में किया जाता है, जबकि ग्राम आयोडीन और 95% अल्कोहल का उपयोग क्रमशः मॉर्डेंट और डीकोलाइज़र के रूप में किया जाता है। चने के दाग के मूल चरण इस प्रकार हैं;
- एक साफ कांच की स्लाइड पर बैक्टीरियल स्मीयर तैयार किया जाता है, गर्मी को स्थिर और ठंडा किया जाता है।
- स्मीयर 1 - 2 मिनट के लिए क्रिस्टल वायलेट से भर जाता है।
- अतिरिक्त दाग हटाने के लिए स्मियर को धीमी गति से चलने वाले नल के पानी से धोया जाता है।
- 1 मिनट के लिए स्मियर पर ग्राम आयोडीन लगाया जाता है।
- स्मीयर को धीमी गति से चलने वाले नल के पानी से धोया जाता है
- स्मीयर को 95% अल्कोहल से 2-5 सेकंड के लिए धोया जाता है और धीमी गति से चलने वाले नल के पानी से धोया जाता है।
- स्मीयर को 1 मिनट के लिए सफ़्रानिन के साथ काउंटर दाग दिया जाता है
- स्मीयर को धीमी गति से चलने वाले नल के पानी से धोया जाता है, सुखाया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।
चने के दाग के अंत में ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया गुलाबी रंग में और ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया बैंगनी रंग में दिखाई देंगे।
चित्रा 01: ग्राम नकारात्मक और ग्राम सकारात्मक बैक्टीरिया
चने के दाग का परिणाम उनकी कोशिका भित्ति में पेप्टिडोग्लाइकन परत की मोटाई से तय होता है। विरंजन चरण के दौरान, प्राथमिक दाग और मोर्डेंट आसानी से ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया से हटा दिए जाते हैं और रंगहीन हो जाते हैं क्योंकि उनके पास एक पतली पेप्टिडोग्लाइकन परत होती है। ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया में प्राथमिक दाग बरकरार रहता है क्योंकि उनके पास एक मोटी पेप्टिडोग्लाइकन परत होती है। प्राथमिक दाग के प्रतिधारण के कारण ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के लिए काउंटर दाग प्रभावी नहीं होगा। इस प्रकार, ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया प्राथमिक दाग रंग, यानी बैंगनी रंग में दिखाई देंगे।काउंटर स्टेन ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया को दाग देगा, और वे पिक कलर में दिखाई देंगे, जो कि सेफ्रेनिन कलर है। इसलिए, चने के दाग से बैक्टीरिया को दो समूहों में वर्गीकृत करना आसान है और यह बैक्टीरिया के भेदभाव और पहचान में मूल्यवान है।
एसिड फास्ट क्या है?
एसिड-फास्टनेस कुछ बैक्टीरिया की एक भौतिक संपत्ति है, विशेष रूप से धुंधला होने की प्रक्रियाओं के दौरान एसिड द्वारा रंग बदलने के लिए उनका प्रतिरोध। एक बार दाग लगने के बाद, ये जीव कई धुंधला प्रोटोकॉल में आम तौर पर पतला एसिड और या इथेनॉल आधारित विरंजन प्रक्रियाओं का विरोध करते हैं। इस प्रकार उन जीवों को 'अम्ल तेज' नाम दिया गया है। यह गुण उनकी कोशिका भित्ति में उच्च स्तर के मोमी पदार्थ (माइकोलिक एसिड) होने के कारण दिखाया गया है। माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की पहचान के लिए यह परीक्षण महत्वपूर्ण है।
चित्र 2: एसिड फास्ट माइकोबैक्टीरिया
यह एसिड फास्ट स्टेन 1882 में पॉल एर्लिच द्वारा विकसित किया गया था। एर्लिच की एसिड फास्ट तकनीक को ज़ीहल-नील्सन द्वारा संशोधित किया गया था और अब इसे अधिक बार उपयोग किया जाता है। एसिड फास्ट स्टेनिंग प्रक्रिया में तीन अलग-अलग अभिकर्मक शामिल हैं। कार्बोल फ्यूशिन का उपयोग प्राथमिक दाग के रूप में किया जाता है। एसिड अल्कोहल का उपयोग डीकोलाइजिंग एजेंट के रूप में किया जाता है। मिथाइलीन ब्लू का उपयोग काउंटर स्टेन के रूप में किया जाता है। धुंधला प्रक्रिया निम्नानुसार की जाती है।
- प्राथमिक दाग (कार्बोल फुकसिन) स्लाइड पर स्थिर नमूने पर लगाया जाता है (सभी कोशिकाओं को लाल रंग में दाग दिया जाएगा)।
- स्लाइड को 5 मिनट तक स्टीम करके गर्म किया जाता है, जिससे दाग ठीक से कोशिकाओं में चले जाते हैं।
- फिर विरंजक घोल डाला जाता है (यह एसिड फास्ट बैक्टीरिया को छोड़कर सभी कोशिकाओं से लाल डाई को हटा देता है)।
- मेथिलीन ब्लू को एक काउंटर स्टेन के रूप में जोड़ा जाता है (यह सभी विकृत जीवाणु कोशिकाओं को रंग देता है)।
- एसिड फास्ट बैक्टीरिया लाल रहते हैं जबकि नॉनएसिड फास्ट बैक्टीरिया नीले रंग में दाग जाते हैं।
चने के दाग और तेजाब के बीच क्या समानताएं हैं?
- चने का दाग और एसिड फास्ट दो विभेदक धुंधला तकनीक हैं।
- दोनों तकनीक बैक्टीरिया को दो समूहों में वर्गीकृत करती हैं।
- दोनों तकनीकों में दो दाग और एक रंग को हल्का करने का उपयोग किया जाता है।
चने के दाग और तेजाब में क्या अंतर है?
चने का दाग बनाम एसिड फास्ट |
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| ग्राम स्टेनिंग एक डिफरेंशियल स्टेनिंग तकनीक है, जो बैक्टीरिया को दो समूहों ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया में अलग करती है। | एसिड फास्ट स्टेन एक डिफरेंशियल स्टेन है जिसका इस्तेमाल एसिड-फास्ट जीवों को नॉन एसिड फास्ट जीवों से पहचानने के लिए किया जाता है। |
| प्राथमिक दाग | |
| चने के दाग में आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला प्राथमिक दाग क्रिस्टल वायलेट होता है। | कार्बोल फुकसिन एसिड फास्ट में इस्तेमाल होने वाला प्राथमिक दाग है। |
| रंग हटाने वाला एजेंट | |
| 95% एल्कोहल चने के दाग में रंग छुड़ाने वाले एजेंट के रूप में प्रयोग किया जाता है। | एसिड अल्कोहल एसिड फास्ट में एक डीकोलाइजिंग एजेंट के रूप में प्रयोग किया जाता है। |
| काउंटर दाग | |
| चने का दाग काउंटर दाग के रूप में सेफ्रेनिन का उपयोग करता है। | एसिड फास्ट स्टेन काउंटर स्टेन के रूप में मेथिलीन ब्लू का उपयोग करता है। |
| अवलोकन | |
| ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया पिक कलर में और ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया बैंगनी रंग में देखे जाते हैं। | एसिड फास्ट बैक्टीरिया लाल रंग में और नॉन एसिड फास्ट बैक्टीरिया नीले रंग में देखे जाते हैं। |
सारांश - ग्राम दाग बनाम एसिड फास्ट
जीवित अवस्था में सूक्ष्मजीवों की कल्पना करना कठिन होता है। इसलिए, उनके गुणों का अध्ययन करने के लिए जैविक दाग और धुंधला प्रक्रियाओं का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। डिफरेंशियल स्टेनिंग एक प्रकार की स्टेनिंग तकनीक है जिसका उपयोग बैक्टीरिया को अलग करने के लिए किया जाता है। ग्राम स्टेन और एसिड फास्ट स्टेन दो डिफरेंशियल स्टेनिंग तकनीकें हैं। ग्राम स्टेनिंग ग्राम नेगेटिव बैक्टीरिया और ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया को उनकी कोशिका भित्ति की मोटाई के आधार पर अलग करता है। एसिड फास्ट स्टेनिंग सेल की दीवार में माइकोलिक एसिड सामग्री के आधार पर एसिड फास्ट बैक्टीरिया को नॉन एसिड फास्ट बैक्टीरिया से अलग करता है। एसिड फास्ट और चने के दाग में यही अंतर है।
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