आरपी एचपीएलसी और एचआईसी के बीच मुख्य अंतर यह है कि आरपी एचपीएलसी अधिक ध्रुवीय मोबाइल चरण और कम ध्रुवीय स्थिर चरण का उपयोग करता है। जबकि, एचआईसी एक हाइड्रोफोबिक स्थिर चरण का उपयोग करता है जो हाइड्रोफोबिक अणुओं को इससे जुड़ने की अनुमति देता है।
क्रोमैटोग्राफी एक विश्लेषणात्मक तकनीक है जो मिश्रण को उसके घटकों में अलग करने में मदद करती है। सबसे पहले, हमें एक समाधान में अलग होने के लिए नमूने को भंग करना होगा। इस विलयन-पदार्थ मिश्रण को चल प्रावस्था कहते हैं। फिर मोबाइल चरण को एक अन्य सामग्री के माध्यम से पारित किया जाता है जिसे स्थिर चरण कहा जाता है। स्थिर चरण घटकों के पृथक्करण को निर्धारित करता है। मोबाइल चरण और स्थिर चरण के बीच सामग्री के विभाजन के कारण अलगाव होता है।
आरपी एचपीएलसी क्या है?
RP HPLC शब्द का अर्थ रिवर्स फेज हाई-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी है। इसमें हाइड्रोफोबिसिटी के अनुसार मिश्रण में घटकों को अलग करना शामिल है। मोबाइल चरण में हाइड्रोफोबिक घटक स्थिर चरण पर स्थिर हाइड्रोफोबिक लिगैंड के साथ लिंक करते हैं, जबकि हाइड्रोफिलिक घटक स्थिर चरण की सतह से जुड़े बिना स्थिर चरण के माध्यम से निकलते हैं।
चित्र 01: एचपीएलसी उपकरण
इसके अलावा, इस पद्धति में अन्य क्रोमैटोग्राफिक तकनीकों की तुलना में अधिक प्रजनन क्षमता है, और यह व्यापक प्रयोज्यता भी दिखाती है। इसलिए, हम सभी एचपीएलसी विधियों के 75% से अधिक के लिए प्रयोगशालाओं में इस पद्धति का उपयोग करते हैं। अधिकांश समय, हम मोबाइल चरण के रूप में एक गलत ध्रुवीय कार्बनिक विलायक के साथ पानी के जलीय मिश्रण का उपयोग करते हैं।इस प्रकार, यह स्थिर चरण की सतह के समाधान में हाइड्रोफोबिक घटकों के लगाव को सुनिश्चित करेगा।
एचआईसी क्या है?
एचआईसी शब्द हाइड्रोफोबिक इंटरेक्शन क्रोमैटोग्राफी के लिए है। यह एक प्रकार का रिवर्स फेज एचपीएलसी है, और इस विधि का उपयोग मुख्य रूप से प्रोटीन जैसे बड़े बायोमोलेक्यूल्स को अलग करने के लिए किया जाता है। इस विधि में, हमें बायोमोलेक्यूल का नमूना बनाने के लिए एक जलीय माध्यम का उपयोग करने की आवश्यकता होती है। ऐसा इसलिए है क्योंकि कार्बनिक सॉल्वैंट्स प्रोटीन के विकृतीकरण का कारण बन सकते हैं। इसके अलावा, यह तकनीक स्थिर चरण की थोड़ी हाइड्रोफोबिक सतह के साथ बड़े अणुओं के बीच बातचीत का उपयोग करती है। इसके अलावा, हमें नमूने में उच्च नमक सांद्रता का उपयोग करना होगा क्योंकि यह प्रोटीन को पैकिंग पर बनाए रखने के लिए प्रोत्साहित करता है; इस प्रक्रिया को सॉल्टिंग आउट कहते हैं। नमक की सघनता को धीरे-धीरे कम करके, हम जैव-अणुओं को उनकी हाइड्रोफोबिसिटी के अनुसार अलग-अलग एल्यूट बना सकते हैं।
आमतौर पर, यह विधि आयन-विनिमय क्रोमैटोग्राफी के विपरीत स्थितियों का उपयोग करती है।इस तकनीक में, सबसे पहले, हमें नमूने में विलेय के सॉल्वैंशन को कम करने के लिए कॉलम के माध्यम से एक बफर समाधान पारित करने की आवश्यकता होती है। यह प्रोटीन के हाइड्रोफोबिक क्षेत्रों को बेनकाब करने के लिए बनाता है। हालांकि, जब अणु अधिक हाइड्रोफोबिक होता है, तो बंधन को बढ़ावा देने के लिए कम नमक की आवश्यकता होती है। यहां, कम हाइड्रोफोबिक विलेय को पहले क्षालन किया जाता है, और नमक की सांद्रता में परिवर्तन के अनुसार, अधिक हाइड्रोफोबिक विलेय को अंतिम रूप दिया जाता है।
आरपी एचपीएलसी और एचआईसी में क्या अंतर है?
क्रोमैटोग्राफी एक मिश्रण में घटकों को अलग करने के लिए एक विश्लेषणात्मक तकनीक है। RP HPLC और HIC दो विशिष्ट क्रोमैटोग्राफिक तकनीकें हैं। आरपी एचपीएलसी और एचआईसी के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि आरपी एचपीएलसी एक अधिक ध्रुवीय मोबाइल चरण और कम ध्रुवीय स्थिर चरण का उपयोग करता है, जबकि एचआईसी एक हाइड्रोफोबिक स्थिर चरण का उपयोग करता है, जो हाइड्रोफोबिक अणुओं को उस पर संलग्न करने की अनुमति देता है।
नीचे दिया गया इन्फोग्राफिक आरपी एचपीएलसी और एचआईसी के बीच अंतर को सारांशित करता है।
सारांश - आरपी एचपीएलसी बनाम एचआईसी
क्रोमैटोग्राफी एक मिश्रण में घटकों को अलग करने के लिए एक विश्लेषणात्मक तकनीक है। RP HPLC और HIC दो विशिष्ट क्रोमैटोग्राफिक तकनीकें हैं। आरपी एचपीएलसी और एचआईसी के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि आरपी एचपीएलसी अधिक ध्रुवीय मोबाइल चरण और कम ध्रुवीय स्थिर चरण का उपयोग करता है, जबकि एचआईसी हाइड्रोफोबिक स्थिर चरण का उपयोग करता है, जो हाइड्रोफोबिक अणुओं को इससे जुड़ने की अनुमति देता है।
