मुख्य अंतर - इम्यूनोफ्लोरेसेंस बनाम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री
रोग निदान, जो आणविक जैविक विधियों का उपयोग करता है, नैदानिक प्रयोगशाला प्रौद्योगिकी का एक उभरता हुआ क्षेत्र बन गया है। इसमें एक जीव में डीएनए, आरएनए या व्यक्त प्रोटीन का विश्लेषण करके किसी बीमारी की पहचान करने और बीमारी के कारण को समझने के लिए सभी परीक्षण और विधियां शामिल हैं। आणविक निदान में तेजी से प्रगति ने संचारी और गैर-संचारी रोगों पर बुनियादी अनुसंधान को सक्षम बनाया है। इनका उपयोग बीमारी में शामिल महत्वपूर्ण जीन या प्रोटीन में अनुक्रम या अभिव्यक्ति के स्तर में परिवर्तन को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आईएफ) और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) कैंसर जीव विज्ञान में दो ऐसी व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली तकनीकें हैं।IF एक प्रकार का IHC है जहां मोनोक्लोनल और पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का विश्लेषण करने के लिए एक फ्लोरोसेंस डिटेक्शन विधि का उपयोग किया जाता है, जबकि IHC मोनोक्लोनल और पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए रासायनिक आधारित विधियों का उपयोग करता है। यह IF और IHC के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आईएफ) क्या है?
इम्युनोफ्लोरेसेंस एक पता लगाने की तकनीक है जहां परख में उपयोग किए जाने वाले एंटीबॉडी का पता लगाने के उद्देश्य से फ्लोरोसेंट डाई या फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग करके लेबल किया जाता है। लेबल किए गए द्वितीयक एंटीबॉडी के परिणामस्वरूप अवांछित पृष्ठभूमि संकेत हो सकते हैं; इसलिए, अगर तकनीक का पता लगाने के दौरान अवांछित संकेतों से बचने के लिए वर्तमान में प्राथमिक एंटीबॉडी को लेबल करने पर आधारित है। इस तकनीक के माध्यम से, प्राथमिक और द्वितीयक एंटीबॉडी के बीच गैर-विशिष्ट बंधन को रोका जाता है, और यह अधिक तेज़ होता है क्योंकि इसमें कोई द्वितीयक ऊष्मायन चरण शामिल नहीं होता है। डेटा गुणवत्ता में भी सुधार हुआ है।
चित्र 01: BrdU, NeuN और GFAP के लिए डबल इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला हो जाना
फ्लोरोक्रोम या फ्लोरोसेंट डाई ऐसे यौगिक हैं जो विकिरण को अवशोषित कर सकते हैं, अधिमानतः अल्ट्रा वायलेट विकिरण जो उत्तेजित होता है। जब कण उत्तेजित अवस्था से जमीनी अवस्था में पहुँचते हैं, तो वे विकिरण का उत्सर्जन करते हैं जिसे एक डिटेक्टर द्वारा एक स्पेक्ट्रम बनाने के लिए पकड़ लिया जाता है और पता लगाया जाता है। यह बहुत महत्वपूर्ण है कि फ्लोरोसेंट लेबल विशेष प्रतिक्रिया के लिए संगत और स्थिर है और सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए इसे एंटीबॉडी से ठीक से संयुग्मित किया जाना चाहिए। सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले फ़्लोरोक्रोम में से एक फ़्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट (FITC) है, जो हरे रंग का होता है, जिसमें क्रमशः 490 एनएम और 520 एनएम के अवशोषण और उत्सर्जन शिखर तरंग दैर्ध्य होते हैं। Rhodamine, IF में प्रयुक्त एक अन्य एजेंट, लाल रंग का है और इसमें 553 एनएम और 627 एनएम के अलग अवशोषण और उत्सर्जन शिखर तरंग दैर्ध्य हैं।
इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (IHC) क्या है?
IHC एक आणविक परीक्षण विधि है जिसका अभ्यास लक्ष्य कोशिका में प्रतिजन की उपस्थिति की पहचान और पुष्टि करने के लिए किया जाता है। लक्ष्य कोशिका एक संक्रामक कण, एक माइक्रोबियल रोगज़नक़ या एक घातक ट्यूमर कोशिका हो सकती है। IHC लक्ष्य कोशिकाओं की कोशिका की सतह पर मौजूद एंटीजन की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए मोनोक्लोनल और पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करता है। तकनीक एंटीजन-एंटीबॉडी बाइंडिंग पर आधारित है। विशेष एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए इन एंटीबॉडी के साथ एक डिटेक्शन मार्कर को संयुग्मित किया जाता है। ये मार्कर रासायनिक मार्कर जैसे एंजाइम, फ्लोरोसेंटली टैग एंटीबॉडी या रेडियो लेबल एंटीबॉडी हो सकते हैं।
चित्र 02: इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा दागे गए माउस-ब्रेन स्लाइस
IHC का सबसे लोकप्रिय अनुप्रयोग कैंसर कोशिका जीव विज्ञान में घातक ट्यूमर की उपस्थिति की पहचान करने के लिए है, लेकिन इसका उपयोग संक्रामक रोगों का पता लगाने के लिए भी किया जाता है।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के बीच समानताएं क्या हैं?
- इम्युनोफ्लोरेसेंस और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री इन विट्रो परिस्थितियों में होती है।
- दोनों तकनीक एंटीजन-एंटीबॉडी पर आधारित हैं
- दोनों बहुत तेज़ तकनीक हैं।
- तकनीकों के परिणाम प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं।
- दोनों ने डेटा गुणवत्ता में सुधार किया है।
- कैंसर और संक्रामक रोगों के निदान में उपयोग की जाने वाली ये तकनीकें।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में क्या अंतर है?
इम्युनोफ्लोरेसेंस बनाम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री |
|
| IF एक पता लगाने की तकनीक है जहां परख में उपयोग किए जाने वाले एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए फ्लोरोसेंट डाई या फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग करके लेबल किया जाता है। | IHC एक पता लगाने की तकनीक है जहां परख में प्रयुक्त एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए रसायनों या रेडियोधर्मी तत्वों का उपयोग करके लेबल किया जाता है। |
| सटीकता | |
| IHC की तुलना में IF तकनीक में सटीकता अधिक है। | IHC में सटीकता कम है। |
| विशिष्टता | |
| IF अधिक विशिष्ट है। | IHC कम विशिष्ट है। |
सारांश - इम्यूनोफ्लोरेसेंस बनाम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री
आणविक तंत्र ने चिकित्सा के क्षेत्र में कई बदलाव लाए हैं, जिससे उन्नत आणविक परीक्षण विधियों को जन्म दिया है जिससे निदान के क्षेत्र में क्रांति आई है।इन आविष्कारों ने बीमारी की तीव्र और सटीक पहचान और पुष्टि की है, जिससे दवाओं के सफल प्रशासन और उत्पादन को सक्षम बनाया गया है। दवाओं के लक्ष्यों को खोजने और दवा चयापचय के दौरान दवा के फार्माकोकाइनेटिक गुणों की पुष्टि करने के लिए इन तकनीकों का उपयोग औषध विज्ञान में भी किया जाता है। IF और IHC दो डायग्नोस्टिक तरीके हैं जो एंटीजन और एंटीबॉडी बाइंडिंग की अवधारणा पर आधारित हैं, हालांकि दोनों तकनीकों में पता लगाने का तरीका अलग है। IF प्रतिजन का पता लगाने के लिए प्रतिदीप्ति के सिद्धांत का उपयोग करता है और IHC प्रतिजन का पता लगाने के लिए रासायनिक संयुग्मन की अवधारणा का उपयोग करता है। यह IF और IHC के बीच का अंतर है।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस बनाम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का पीडीएफ संस्करण डाउनलोड करें
आप इस लेख का पीडीएफ संस्करण डाउनलोड कर सकते हैं और उद्धरण नोट के अनुसार इसे ऑफ़लाइन उद्देश्यों के लिए उपयोग कर सकते हैं। कृपया पीडीएफ संस्करण यहां डाउनलोड करें इम्यूनोफ्लोरेसेंस और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के बीच अंतर।
