यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि यीस्ट एक हाइब्रिड डीएनए-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है जबकि यीस्ट दो हाइब्रिड प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है।
सेलुलर अणुओं के बीच बातचीत का अध्ययन जीन अभिव्यक्ति और प्रोटीन पथ में शामिल मान्यता साइटों को परिभाषित करने में मदद कर सकता है। डीएनए और प्रोटीन इंटरैक्शन सेलुलर प्रक्रियाओं जैसे डीएनए संशोधनों और ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन इत्यादि के अभिन्न अंग हैं। दूसरी ओर, प्रोटीन और प्रोटीन इंटरैक्शन सेलुलर प्रक्रियाओं जैसे प्रतिकृति, ट्रांसक्रिप्शन, अनुवाद और सिग्नल ट्रांसडक्शन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।इसलिए, विभिन्न assays के माध्यम से सेलुलर अणुओं के इन अंतःक्रियाओं की पहचान करना गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है। यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड डीएनए-प्रोटीन और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए दो इन विट्रो आधारित परख हैं।
यीस्ट वन हाइब्रिड क्या है?
यीस्ट वन हाइब्रिड (Y1H) इंट्रासेल्युलर डीएनए-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है। इस पद्धति को पहली बार 1993 में वांग और रीड द्वारा स्थापित किया गया था। तब से, इसने जैविक अनुसंधान में एक बड़ी शक्ति दिखाई है। इस परख में, दो मुख्य घटक होते हैं: डीएनए चारा और प्रोटीन शिकार।
चित्र 01: यीस्ट वन हाइब्रिड
प्रक्रिया में, एक डीएनए अनुक्रम (डीएनए चारा) को पहले दो अलग-अलग पत्रकारों (HIS3, LacZ) के अपस्ट्रीम में क्लोन किया जाता है।ये रिपोर्टर निर्माण एक यीस्ट स्ट्रेन के जीनोम में एकीकृत होते हैं। ट्रांसक्रिप्शनल कारकों को प्रोटीन के शिकार के रूप में लिया जाता है। ट्रांसक्रिप्शनल कारक हाइब्रिड प्रोटीन बनाने के लिए यीस्ट Gal4 ट्रांसक्रिप्शनल फैक्टर के ट्रांसक्रिप्शनल एक्टिवेशन डोमेन (AD) से जुड़े होते हैं। इस पूरे हाइब्रिड प्रोटीन को यीस्ट स्ट्रेन में डालने से पहले एक प्लास्मिड में एकीकृत किया जाता है। पुनः संयोजक प्लास्मिड की शुरूआत के बाद, जब ट्रांसक्रिप्शनल कारक डीएनए टुकड़े के साथ बातचीत करता है, तो एडी की मात्रा रिपोर्टर जीन अभिव्यक्ति (HIS3or LacZ) को सक्रिय करती है। प्लास्मिड का अनुक्रमण ट्रांसक्रिप्शनल कारक की पहचान की अनुमति देता है जो डीएनए के टुकड़े से बंध सकता है। हाल ही में, रोग निदान अनुसंधान के लिए खमीर एक संकर विधि का उपयोग किया गया था। इसलिए, भविष्य में, वैज्ञानिक अनुसंधान और चिकित्सा उपचार में इस परख का अधिक व्यापक रूप से उपयोग किया जाएगा।
यीस्ट टू हाइब्रिड क्या है?
यीस्ट टू हाइब्रिड (Y2H) इंट्रासेल्युलर प्रोटीन और प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है।यह विधि मूल रूप से 1989 में स्टेनली फील्ड्स और ओके-क्यू सॉन्ग द्वारा खोजी गई थी। यह तकनीक खमीर के गैल 4 ट्रांसक्रिप्शन कारक का उपयोग करके प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन का पता लगाती है।
चित्र 02: यीस्ट टू हाइब्रिड
इस विधि में, दो फ्यूजन (हाइब्रिड) पहले रुचि के प्रोटीन का उपयोग करके बनाए जाते हैं: एक प्रोटीन को डीएनए बाइंडिंग डोमेन (डीबीडी) के साथ फ्यूज करके और दूसरे प्रोटीन को गैल4 ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर के एक्टिवेटर डोमेन (एडी) के साथ फ्यूज करके।. डीबीडी के साथ जुड़े प्रोटीन को चारा के रूप में जाना जाता है, जबकि एडी के साथ जुड़े प्रोटीन को शिकार के रूप में जाना जाता है। यीस्ट स्ट्रेन में, चारा और शिकार की परस्पर क्रिया पर, DBD और AD को रिपोर्टर जीन के ऊपर एक कार्यात्मक Gal4 प्रतिलेखन कारक उत्पन्न करने के लिए निकटता में लाया जाता है।कार्यात्मक प्रतिलेखन कारक रिपोर्टर जीन अभिव्यक्ति को सक्रिय करता है। इसके अलावा, इस पद्धति का उपयोग वर्तमान में स्तनधारी कोशिकाओं में अभिन्न झिल्ली प्रोटीन की बातचीत की जांच के लिए किया जाता है।
खमीर एक संकर और खमीर दो संकर के बीच समानताएं क्या हैं?
- यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड डीएनए-प्रोटीन और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए दो इन विट्रो आधारित परख हैं।
- ये परख यीस्ट स्ट्रेन का उपयोग करते हैं।
- दोनों परख Gal4 प्रतिलेखन कारक के सक्रियण डोमेन (AD) का उपयोग करते हैं।
- वे बातचीत का पता लगाने के लिए रिपोर्टर जीन (HIS3, या LacZ) अभिव्यक्ति का उपयोग करते हैं।
- उनके पास चारा और शिकार है।
- दोनों परख आधुनिक जैविक अनुसंधान में अत्यधिक उपयोगी हैं।
यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड में क्या अंतर है?
यीस्ट वन हाइब्रिड डीएनए और प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है जबकि यीस्ट टू हाइब्रिड प्रोटीन और प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है।इस प्रकार, यह खमीर एक संकर और खमीर दो संकर के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। इसके अलावा, खमीर में एक संकर, चारा एक डीएनए टुकड़ा है, और शिकार एक प्रोटीन अणु है। दूसरी ओर, खमीर में दो संकर, चारा और शिकार दोनों प्रोटीन अणु होते हैं।
नीचे दिए गए इन्फोग्राफिक में यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड के बीच अंतर को सारणीबद्ध रूप में एक साथ तुलना के लिए सूचीबद्ध किया गया है।
सारांश - यीस्ट वन हाइब्रिड बनाम यीस्ट टू हाइब्रिड
यीस्ट एक हाइब्रिड और यीस्ट दो हाइब्रिड इन विट्रो आधारित परख में दो महत्वपूर्ण हैं। यीस्ट वन हाइब्रिड डीएनए और प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है जबकि यीस्ट टू हाइब्रिड प्रोटीन और प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए इन विट्रो आधारित परख है। इस प्रकार, यह खमीर एक संकर और खमीर दो संकर के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
