सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन में, एक निरंतर सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग किया जाता है, जबकि सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन में, एक बंद सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग किया जाता है।
सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन दो समान प्रकार की तकनीकें हैं जिनका उपयोग विशिष्ट प्रकार के मैक्रोमोलेक्यूल्स को अलग करने के लिए किया जाता है। दोनों तकनीकों में, एक सुक्रोज घनत्व ढाल का उपयोग किया जाता है। लेकिन सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन में, एक निरंतर घनत्व ढाल का उपयोग किया जाता है, जबकि सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन में, एक असंतत घनत्व ढाल का उपयोग किया जाता है।
सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन क्या है?
सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग डीएनए, आरएनए और प्रोटीन जैसे मैक्रोमोलेक्यूल्स को विभाजित करने के लिए किया जा सकता है। इस तकनीक में कई चरण होते हैं। वे सुक्रोज ग्रेडिएंट तैयारी, सेंट्रीफ्यूजेशन, पृथक्करण और रेफरेंस हैं। इस तकनीक में ढाल की तैयारी महत्वपूर्ण कदम है। इस तकनीक में, विभिन्न आकार के मैक्रोमोलेक्यूल्स वाले नमूने को सुक्रोज ग्रेडिएंट कॉलम की सतह पर स्तरित किया जाता है। सेंट्रीफ्यूजिंग करते समय, विभिन्न आकार के मैक्रोमोलेक्यूल्स अलग-अलग दरों पर सुक्रोज ग्रेडिएंट कॉलम के माध्यम से तलछट करते हैं। अवसादन कई कारकों पर निर्भर करता है, जिसमें सेंट्रीफ्यूजेशन बल, आकार आकार और मैक्रोमोलेक्यूल्स का घनत्व, घनत्व और ढाल की चिपचिपाहट शामिल है। सेंट्रीफ्यूजेशन के अंत में, मैक्रोमोलेक्यूल्स को घनत्व द्वारा स्थानिक रूप से अलग किया जाता है। बड़े मैक्रोमोलेक्यूल्स (उच्च घनत्व वाले मैक्रोमोलेक्यूल्स) तल की ओर तलछट। हल्के वाले (कम घनत्व वाले मैक्रोमोलेक्यूल्स) ढाल के शीर्ष पर बने रहते हैं।इसलिए, अणु अलग-अलग बैंड के रूप में अलग हो जाते हैं। फिर बैंड को अलग किया जाना चाहिए, और सुक्रोज से विशिष्ट मैक्रोमोलेक्यूल की शुद्धि की जानी चाहिए।
चित्र 01: सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन
आवेदन पक्ष पर, डीएनए अणुओं के विभाजन के लिए इस विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन आमतौर पर प्रोटीन जटिल आकार और संरचना को चिह्नित करने के लिए उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, इस तकनीक का उपयोग mRNA के आंशिक शुद्धिकरण के लिए किया जाता है।
सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन क्या है?
सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक और तकनीक है जो मैक्रोमोलेक्यूल्स के विभाजन को सक्षम बनाता है। सुक्रोज घनत्व ढाल अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के विपरीत, सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक असंतत घनत्व ढाल का उपयोग करता है।असतत चरणों में सुक्रोज की सांद्रता ऊपर से नीचे की ओर बढ़ती है। इस तकनीक में, एक अपकेंद्रित्र ट्यूब, तथाकथित सुक्रोज कुशन में एक सुक्रोज समाधान की एक छोटी मात्रा के ऊपर स्पष्ट निकालने को रखकर पृथक्करण प्राप्त किया जाता है। यह हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूजेशन में बेहतर पृथक्करण की अनुमति देता है। जब अणु सुक्रोज कुशन के बीच एक बैंड के रूप में अलग हो जाते हैं, तो सफेद बैंड को एकत्र और शुद्ध किया जा सकता है। इसके अलावा, सुक्रोज कुशन विधि का उपयोग करके अशुद्धियों को और दूर किया जा सकता है। सुक्रोज कुशन विधि 60-70% ट्यूब को नमूने से भरने की अनुमति देती है। इसलिए, सुक्रोज कुशन विधि अधिक मात्रा में नमूने को संसाधित करने में सक्षम बनाती है।
सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के बीच समानताएं क्या हैं?
- सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन दो तकनीकें हैं जिनका उपयोग मैक्रोमोलेक्यूल्स के मिश्रण को अलग करने के लिए किया जाता है।
- दोनों विधियों में, एक सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग किया जाता है।
- सेंट्रीफ्यूजेशन दोनों तरीकों में एक कदम है।
- अणु प्रत्येक विधि में एक बैंड या क्षेत्र के रूप में तलछट करते हैं।
सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन में क्या अंतर है?
सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक ऐसी तकनीक है जो सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में एक निरंतर सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग करती है जबकि सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक ऐसी तकनीक है जो एक बंद सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग करती है। इस प्रकार, यह सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।
इसके अलावा, सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन नमूने की अधिक मात्रा को संसाधित करने की अनुमति देता है जबकि सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन नमूने की तुलनात्मक रूप से कम मात्रा को संसाधित करने की अनुमति देता है।
नीचे इन्फोग्राफिक सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के बीच अधिक अंतर को सारणीबद्ध करता है।
सारांश - सुक्रोज ग्रेडिएंट बनाम सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन
सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक सतत सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग करके मैक्रोमोलेक्यूल्स को अलग करता है। इसके विपरीत, सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन एक मिश्रण में विशिष्ट प्रकार के कणों को अलग करने के लिए एक असंतत सुक्रोज ग्रेडिएंट का उपयोग करता है। तो, यह सुक्रोज ग्रेडिएंट और सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। सुक्रोज कुशन विधि रूपात्मक रूप से अक्षुण्ण कणों के संग्रह की अनुमति देती है क्योंकि यह सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन के विपरीत यांत्रिक तनाव का कारण नहीं बनता है, जो अणुओं को ट्यूब के नीचे तक कुचल देता है। इसके अलावा, सुक्रोज कुशन अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन सुक्रोज ग्रेडिएंट अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन की तुलना में नमूने की अधिक मात्रा को संसाधित करने की अनुमति देता है।
